Molecular characterization of Mycoplasma synoviae isolates from commercial chickens in Iran

شناسايي مايكوپلاسما سينوويه با استفاده از روش هاي كشت و واكنش زنجيره اي پليمراز از مزارع ماكيان تجاري استان هاي مختلف ايران گزارش شده است. آناليز فيلوژنتيك جدايه هاي مايكوپلاسما سينوويه بر اساس ژن هاي 16S rRNA و هماگلوتينين (vlhA)، طي مطالعاتي بررسي گرديده است. محصولات واكنش زنجيره اي پليمراز مربوط به قطعات ژن 16S rRNA كه از جدايه هاي ايران بدست آمده بودند، تعيين توالي گرديد و سپس با قطعات مربوط به 16S rRNA موجود در بانك ژن مقايسه شدند. تغييرات، تنوع و تفاوت بين نوكليوتيد هاي همه جدايه ها مورد بررسي قرار گرفتند و مطالعه فيلوژنتيك نشان داد كه توالي مايكوپلاسما سينويه هاي جدا شده از ايران بيشترين نزديكي را با توالي هاي مايكوپلاسما سينوويه از كشور برزيل داشتند. همچنين بررسي توالي انتــــــهاي N-terminal مربوط به ژن كد كننده vlhA به عنوان يك جايگزين براي رديابي و تايپينگ اوليه سويه هاي فيلدي مايكوپلاسما سينوويه، در طيور صنعتي به كار برده شده است. مطابقت كاملي بين توالي همه جدايه هاي ايران و عدم تغيير در توالي ناحيه انتهاي vlhA همه جدايه هاي مايكوپلاسما سينوويه مشاهده گرديد و همچنين تمايز بين جدايه هاي ايران و سويه واكسينال MS-H نشان داده شد. اخيرا" يك ناحيه مربوط به قسمت محافظت شده ژن vlhA در مايكوپلاسما سينوويه به منظور تعيين تيپ مايكوپلاسماي فيلدي در ايران و تمايز سويه واكسن زنده MS-H، تعيين توالي و بررسي گرديد. علاوه بر آن، يك روش RFLP بر مبناي پلي مورفيسم تك نوكليوتيدي كه در تمامي جدايه هاي فيلدي ايران وجود دارد و بين جدايه هاي فيلدي و سويه MS-H تمايز ايجاد مي كند، راه اندازي شده است. اين روش PCR-RFLP قادر به تفريق همه جدايه هاي فيلدي از سويه واكسينال بود.

Detection of Mycoplasma synoviae (MS) by culture and polymerase chain reaction (PCR) has been reported from commercial chicken farms in different provinces of Iran. In some reports the phylogenetic analysis of MS isolates based on 16S rRNA and variable lipoprotein hemagglutinin (vlhA) genes have been carried out. The PCR product containing partial 16S rRNA genes of Iranain isolates was sequenced, and compared with 16S rRNA gene of MS sequences which were available in GenBank. Variations, polymorphisms, and differences between nucleotides of all isolates were observed. Phylogenetic analysis of these sequences showed that all MS isolates from Iran were most closely related to sequences of MS from Brazil. Sequence analysis of the N-terminal end of the hemagglutinin encoding gene vlhA were also used as an alternative for the detection and initial typing of field strains of MS in commercial poultry. The results showed that there was a complete concordance between all Iranian isolates nucleotide sequence and the 5?-vlhA region sequence remained unchanged in all MS isolates and demonstrated differentiation between Iranian isolates and live commercial MS-H vaccine strain. More recently, the single-copy domain of the conserved region of vlhA gene in MS was sequenced, analyzed and verified to type MS field isolates in Iran and live vaccine MS-H strain. In addition, a restriction fragment length polymorphism (RFLP) method was established based on single nucleotide polymorphism that existed in all field isolates of Iran to differentiate between these field isolates and MS-H. This PCR-RFLP method allowed differentiating all MS field isolates from the vaccine strain.