Development of antibody-based microarray assay for quantitative detection of aflatoxin B1

زمينه مطالعه: آفلاتوكسين ‌1B يك متابوليت بسيار سمي است كه توسط گونه هاي آسپرژيلوس توليد گرديده و طيف وسيعي از محصولات كشاورزي را آلوده مي كند. هدف: هدف از اين مطاله توسعه يك روش ايمونو اسي سريع و حساس در فرمت ريزآرايه اي به منظور اندازه گيري كمي آفلاتوكسين ‌1B ، در جهت ارزيابي كارايي اين روش به منظور توسعه روش‌هاي غربالگري با كارايي بالا براي استفاده در صنايع مواد غذايي انساني و دامي بوده است. روش كار: به دنبال بهينه سازي سنجش با استفاده از تكنيك دات بلات و روش ايمونواسي رقابتي غيرمستقيم، غلظت بهينه از آفلاتوكسين متصل شده به آلبومين سرم گاوي بر روي 16ساب اري بر روي اسلايده‌هاي پوشيده شده با نيتروسلولوز پرينت گـرديـده و سنجـش ايمـونـواسي رقابتي اعمال گرديد. نتايج: با استفاده از اين روش، سنجش آفلاتوكسين در طيف كاري برابر pg/g15 تا ng/g04/3 با حد تشخيص pg/g1 تعيين گرديد. به منظور ارزيابي كارايي اين ميكرواري توليد شده در مواد غذايي، آرد گندم به صورت مصنوعي با مقادير مختلف توكسين آلوده گرديد و پس از استخراج، طيف كاري برابر ng/g11/0-15/4 با حد تشخيصي برابر pg/g30 در آرد گندم حاصل گرديد. ميانگين تخمين بازيافت 9%±94تعيين گرديد كه نشان دهنده صحت سنجش با استفاده از اين روش مي‌باشد. اين سنجش در مدت زمان3 ساعت تكميل گرديد. نتيجه گيري نهايي: اين روش سنجش مطرح شده در فرمت ريزآرايه‌اي مي‌تواند به عنوان روش اندازه‌گيري سريع با حساسيت بالا براي سنجش دقيق آفلاتوكسين ‌1B در نمونه‌هاي گندم به كار رود.

Background: Aflatoxin B1 (AFB1) is a toxic metabolite produced by Aspergillus species that contaminates a wide range of agricultural products. OBJECTIVES: This study was designed to develop a rapid and highly sensitive immunoassay method in microarray format for quantitative detection of AFB1 to evaluate the potential of microarray platform for high-throughput screening, which can be beneficial in food and feed industry. METHODS: Following successful optimization, using an indirect competitive immunoassay in dot blot format, AFB1-bovine serum albumin (AFB1-BSA) conjugate was contact-printed onto 16 isolated sub-arrays on multi-pad nitrocellulose coated slides; subsequently used in competitive binding assays. RESULTS: Using the aforemention-ed assay, AFB1 was determined from 15 pg/g to 3.04 ng/g working range with detection limit (LOD) of 1 pg/g. To evaluate assay performance in real food matrices, the authors spiked wheat samples with different concentration of AFB1. After extraction, working ranges of 0.11-4.15 ng/g with detection limit of 30pg/g was determined. Good recoveries (94±9%) were obtained, demonstrat-ing accurate detection of AFB1 concentrations in wheat samples. Assay procedure completed in 3 hours. CONCLUSIONS: The results indicated that the proposed developed assay in microarray format could be used for rapid and sensitive detection of AFB1in wheat samples.