Author/Authors :
دليمي اصل، عبدالحسين نويسنده Department of Medical Parasitology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran Dalimi, A. , سبزواري، غلامعلي نويسنده Department of Medical Parasitology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran Sabevarinejad, Gh. , غفاري فر، فاطمه نويسنده Department of Medical Parasitology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran Ghafarifar, F. , فروزنده مقدم، مهدي نويسنده Department of Medical Biotechnology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran Forouzandeh-Moghadam, M.
Abstract :
نيوسپورا كانينوم از تك ياخته هاي كوكسيديايي و عامل سقط جنين در گاوها شيري و گوشتي و همچنين اختلالات عصبي در سگ ها و اسبان مي باشد. در تشخيص نيوسپورا كانينوم از طريق نمونه مدفوع روشهاي ملكولي حساس شناخته شده اند كه مي توانند بطور اختصاصي انگل را تشخيص دهند. در مطالعه حاضر، از روش واكنش زنجيره اي پليمراز براي تكثير قطعه ژني اختصاصي Nc5 براي تشخيص اووسيست نيوسپورا در مدفوع سگ در استان لرستان استفاده شده است. نمونه مدفوع از سگهاي گاو داريهاي كوچك جمع آوري شد. نمونه ها در بيكرومات سديم 5/2 درصد مخلوط و در دماي يخچال نگهداري گرديد. DNA ژنومي با روش CTAB استخراج و با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي واكنش زنجيره اي پليمراز انجام و قطعه حاصل تعيين ترداف گرديد. در نتيجه واكنش زنجيره اي پليمراز نمونه هاي مثبت ، باندي به اندازه 340 جفت باز حاصل گرديد. ترادف بازي حاصل نيز داراي 99 درصد مشابهت با نمونه هاي نيوسپورا كانينوم ثبت شده در بانك ژن بوده است. از مجموع 428 نمونه جمع آوري شده 9 نمونه مثبت تشخيص داده شد.
Abstract :
Neospora caninum is a coccidian protozoan that causes abortion in dairy and beef cattle and neurological disorders in dogs and horses. To identify N. caninum oocysts in the dog feces the molecular approaches are known as sensitive methods that specifically detect the oocysts. In present study, a polymerase chain reaction (PCR) targeting N. caninum specific Nc5 genomic fragment was performed to identify the N. caninum DNA in the feces of naturally infected dogs of Lorestan province, West Iran. Fecal samples of dogs living in small dairy farms were collected. The samples were homogenized in 2.5% Potassium dichromate (K2Cr2O7) and stored at 4 °C. Genomic DNA was extracted from the feces using CTAB protocol. PCR assay and DNA sequencing were performed with specific primers. DNA amplification of the Nc5 formed a 340bp fragment for the N. caninum specimens; however, the fragment was 99% identical to the homologous sequences from Neospora caninum isolates. Totally, 9 positive samples of N. caninum were detected by PCR from 428 fecal specimens.
