A comparative study of parthenogenetic activation and in vitro fertilization of in vitro matured caprine oocytes

هدف اين مطالعه مقايسه فعال سازي پارتنوژنتيک و بارورسازي آزمايشگاهي اووسيت‌هاي بزي بلوغ يافته در محيط زنده بود. تعداد 881 کمپلکس اوسيت کومولوس (COC’s) از 243 تخمدان جمع آوري شد. اووسيت‌ها در محيط کشت TCM-199 حاوي eCG (IU/ml 20)، hCG (IUµg/ml 20)، استراديول-17بتا (µg/ml 1)، جنين‌هاي BSA تست شده (mg/ml 3) مکمل‌ سازي شده با سرم گاوي جنيني 10% در 5/38 درجه سانتيگراد و CO2 5% در يک انکوباتور تحت هواي مرطوب به مدت 27 ساعت بالغ شدند. بر اساس وسعت کومولوس، ميزان بلوغ 86/86% بود. اووسيت‌هاي بلوغ يافته به صورت ظاهري (تعداد = 749) انتخاب شده، برهنه شده و به صورت تصادفي به دو گروه تقسيم شدند. گروه 1 (تعداد = 223) اووسيت‌هاي بلوغ يافته آزمايشگاهي با µm 5 يونوفور کلسيم به مدت 5 دقيقه فعال شده و در محيط کشت mCR2aa حاوي mM DMAP 5 به مدت 4 ساعت کشت داده شد. بعد از 4 ساعت درمان DMAP، زيگوت‌هاي احتمالي شستشو داده شده و در محيط کشت جنيني کشت داده شدند. گروه 2 (تعداد = 526) اووسيت‌هاي بلوغ يافته آزمايشگاهي براي بارورسازي آزمايشگاهي در mTALP با استفاده از مايع مني تازه يک آهوي آبستن يماني بالغ نژاد خالص انجام شد و در محيط mCR2aa آزمايشگاهي کشت داده شد. تکامل زيگوت‌هاي مفروض در هر 24 ساعت تا 9 روز پس از فعال سازي يا بارورسازي زير ميکروسکوپ فاز معکوس مشاهده شد. ميزان شکافت، درصد مورولا و بلاستوسيست در گروه‌هاي 1 و 2 به ترتيب 36/67%، 07/23% و 23/9%، و 99/30%، 63/19% و 28/9% بودند. نتايج نشان داد ميزان شکافت متعاقب فعال سازي پارتنوژنتيک با يونومايسين/6-DMAP نسبت به IVF به طور قابل مقايسه‌اي بيشتر بود.

The aim of the study was to compare the parthenogenetic activation and in vitro fertilization (IVF) of in vitro matured caprine oocytes. A total of 881 cumulus-oocyte complexes (COC’s) were collected from 243 ovaries. Oocytes were matured in TCM-199 medium containing eCG (20 IU/ml), hCG (20 IUµg/ml), oestradiol-17β (1 µg/ml), BSA embryo tested (3 mg/ml) supplemented with 10% fetal bovine serum at 38.5 C and 5% CO2 in an incubator under humidified air for 27 h. Based on cumulus expansion, the maturation rate was 86.86%. Morphological matured oocytes (n=749) were selected, denuded and randomly divided into two groups. Group 1 (n=223) in vitro matured oocytes activated with 5 µm calcium ionophore for 5 min and cultured in mCR2aa medium containing 5 mM DMAP for 4 h. After 4 h of DMAP treatment, the presumptive zygotes were washed and cultured in the embryo culture medium. Group 2 (n=526) in vitro matured oocytes processed for IVF in mTALP using fresh semen of a fertile pure bred adult Sirohi buck and in vitro culture in mCR2aa medium. Development of putative zygotes was observed every 24 h till day 9 post activation or fertilization under inverted phase contrast microscope. The cleavage rate, morula and blastocyst percentage in groups 1 and 2 were 67.36%, 23.07% and 9.23%, and 30.99%, 19.63% and 9.82%, respectively. The results indicated that the cleavage rate was comparatively higher following parthenogenetic activation with ionomycin/6-DMAP than IVF.