Detection and identification of Malassezia species in domestic animals and aquatic birds by PCR-RFLP

هدف مطالعه حاضر شناسايي مخمرهاي مالاسزيا در سطح گونه در حيوانات اهلي و پرندگان آبزي به وسيله روش PCR-RFLP بود. نمونه‌ها با استفاده از چسب اسکاچ و سواب از 471 حيوان شامل 97 اسب، 102 گاو، 105 گوسفند، 20 شتر، 60 سگ، 30 گربه، 1 هامستر، 1 سنجاب، 50 پرنده آبزي و 5 بوقلمون جمع‌آوري و تمامي نمونه‌ها در محيط کشت ليمينگ-نوتمن آگار اصلاح شده تلقيح شدند. DNA استخراج شده از کلني‌هاي مخمري، با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي از ناحيه 26S rDNA و به وسيله واكنش زنجيره‌اي پليمراز (PCR) تکثير شد.RFLP از محصولات واكنش زنجيره‌اي پليمراز با استفاده از آنزيم Hin6I انجام شد. محصولات واكنش زنجيره‌اي پليمراز و RFLP به وسيله الکتروفورز در ژل آگارز مشاهده شدند. فراواني مخمرهاي مالاسزيا در حيوانات مختلف به صورت زير بود: 64/15% در اسب، 74/12% در گاو، 38/12% در گوسفند، 33/28% در سگ، 66/62% در گربه و 26% در حيوانات آبزي. 80 کلني متعلق به 6 گونه، جداسازي و خالص سازي شد. م. گلوبوزا 25/41%، م. فورفور 5/22%، م. رستريکتا 15%، م. سيمپودياليس 15%، م. پکي درماتيس 5% و م. اسلوفيه 25/1%. بنابراين، نتيجه‌گيري مي‌شود که گونه‌هاي مختلف چربي دوست مالاسزيا در انواع وسيعي از حيوانات و پرندگان يافت مي‌شوند و PCR-RFLP يک روش مناسب براي شناسايي گونه‌هاي مختلف مالاسزيا مي‌باشد.

The present study aimed at detection and species-level identification of the Malassezia yeasts in domestic animals and aquatic birds by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP). Samples were collected using tape strips and swabs from 471 animals including 97 horses, 102 cattle, 105 sheep, 20 camels, 60 dogs, 30 cats, 1 hamster, 1 squirrel, 50 aquatic birds and 5 turkeys. Tape-strip samples were examined by direct microscopy. All samples were inoculated on modified Leeming and Notman agar medium. DNA extracted from the yeast colonies was amplified by PCR using primers specific for 26S rDNA. RFLP of the PCR products was performed using Hin6I enzyme, and PCR and RFLP products were visualized by agarose gel electrophoresis. Malassezia yeasts were detected at the following frequencies: 15.46% in horses, 12.74% in cattle, 12.38% in sheep, 28.33% in dogs, 26.66% in cats and 26% in aquatic birds. Eighty colonies of 6 species were isolated: Malassezia globosa 41.25%, Malassezia furfur 22.5%, Malassezia restricta 15%, Malassezia sympodialis 15%, Malassezia pachydermatis 5% and Malassezia slooffiae 1.25%. Therefore different lipophilic Malassezia species are found in a wide diversity of animals and aquatic birds. PCR-RFLP is a suitable technique for identification of different Malassezia species.