Isolation, cloning and expression of the Brucella melitensis Omp31 gene

بروسلوزيس يكي از بيماري‌هاي مشترك انسان و دام است كه از طريق حيوانات يا فرآورده‌هاي حيواني آلوده به انسان‌ها منتقل مي‌شود. گرچه اين بيماري در تمام نقاط دنيا گزارش شده است، اما در حال حاضر در نواحي مديترانه‌اي، آمريكاي جنوبي و غربي، اروپاي شرقي، آسيا، آفريقا، نواحي كارائيب و خاورميانه بيشتر يافت مي‌شود. جنس بروسلا حداقل به نه گونه طبقه بندي شده است كه گونه بروسلا مليتنسيس بيماريزاترين گونه آن است كه در تمام نقاط دنيا يافت مي‌شود. يكي از پروتئين‌هاي غشايي خارجي بروسلا مليتنسيس،Omp31 ، به عنوان يك ايمونوژن حفاظتي و نيز يك كانديد مهم واكسن شناخته شده است. تهيه اين پروتئين به وسيله روش‌هاي بيوشيميايي به دليل آلودگي با پروتئين‌هاي ديگر سبب محدوديت‌هايي در مطالعات بيشتر بر روي آن شده است. در مطالعه حاضر، ژن كد كننده Omp31 بروسلا مليتنسيس به درون پلاسميد pET32b(+) وارد شد. صحت پلاسميد ساخته شده با استفاده از آنزيم‌هاي هضم كننده و سكوئنسيگ تاييد گرديد. پروتئين Omp31 در باكتري اشريشيا كلي بيان و پروتئين نوتركيب حاصل به روش كروماتوگرافي با استفاده از آگارز متصل به نيكل خالص گرديد. الکتروفورز و ايمونوبلاتينگ پروتئين نوترکيب Omp31 را تاييد نمود. پروتئين نوتركيب Omp31 توليد شده مي‌تواند در مطالعات ايمونولوژيكي و بررسي آن به عنوان کانديد واكسن عليه بروسلا استفاده شود.

Brucellosis is a zoonotic disease transmitted to humans either from animals or from their products. Although brucellosis can be found worldwide, the Mediterranean Basin, South and Central America, Eastern Europe, Asia, Africa, the Caribbean, and the Middle East have currently been listed as high-risk regions. The genus Brucella is classified in at least nine species. Brucella melitensis is the global pathogenic species of Brucella. The outer membrane protein 31, (Omp31) from B. melitensis is considered as a protective immunogen and an important candidate vaccine. Contamination of purified Omp31 protein by biochemical methods has made some restrictions in practical experiments. In this study, the Omp31coding gene of B. melitensis Rev 1 strain was inserted in pET32b(+) plasmid with extra His-tag sequence. The integrity of the constructed plasmid was confirmed using restriction enzyme mapping and sequencing. Omp31 was expressed after induction with IPTG in Escherichia coli BL21. Recombinant Omp31 (rOmp31) was purified by chromatography through Ni-agarose. The electrophoresis showed successful purification and immunoblotting confirmed immunereactivity of rOmp31. Obtained rOmp31 could be used as a research experimental tool in protection assays to find its potential as a vaccine candidate.