Molecular detection of infectious bronchitis and Newcastle disease viruses in broiler chickens with respiratory signs using Duplex RT-PCR

بيماري برونشيت عفوني (IB) و نيوكاسل (ND) از بيماري هاي بسيار واگبر و از نظر اقتصادي داراي اهميت بالا مي باشند كه مجراي تنفسي طيور را تحت تاثير قرار مي دهند و باعث ضررهاي اقتصادي در صنعت طيور در سراسر دنيا مي گردند. در مطالعه حاضر شناسايي همزمان و تفريق عوامل ايجاد كننده بيمارهاي برونشيت عفوني و نيوكاسل با استفاده از روش ترانس-كريپتاز معكوس و واكنش زنجيره اي پلي مراز (RT-PCR) دوگانه مورد تحقيق قرار گرفت. RNA ژنومي از سويه هاي مرجع و واكسن ويروس هاي برونشيت عفوني (IBV) و نيوكاسل (NDV) استخراج گرديد و سپس cDNA سنتز شد. با استفاده از دو جفت پرايمر عمومي براي شناسايي IBV و NDV روش RT-PCR دوگانه ابداع گرديد. به منظور ارزيابي كارايي روش PCR دوگانه ابداع شده تعداد 12 گله گوشتي با علايم عفونت مجراي تنفسي نمونه برداري شدند (نمونه هاي ناي، ريه و كليه از پرندگان مشكوك به عفونت هاي IBV و NDV). بعد از استخراج RNA از بافت ها و سنتز cDNA، حضور ژنوم IBV و NDV با استفاده از روش RT-PCR دوگانه در بافت ها جستجو گرديد. نتايج نشان داد كه تعداد سه گله از دوازده گله مورد بررسي براي IBV مثبت و تعداد دو گله براي IBV و NDV مثبت بودند. نتايج بدست آمده نشان داد كه روش ابداع شده RT-PCR دوگانه يك روش سريع و حساس براي شناسايي همزمان IBV و NDV در پرندگان داراي عفونت هاي تنفسي مي باشد.

Infectious bronchitis (IB) and Newcastle disease (ND) are highly contagious and the most economically important diseases of the poultry affecting respiratory tract and causing economic losses in poultry industry throughout the world. In the present study, the simultaneous detection and differentiation of causative agents of these diseases were investigated using duplex-RT-PCR. RNA was extracted from vaccinal and reference strains of infectious bronchitis virus (IBV) and Newcastle disease virus (NDV) and then cDNA was synthesized. Using two universal primer sets for detection of IBV and NDV, the duplex-RT-PCR was developed. In order to assess the efficiency of the developed duplex RT-PCR, a number of 12 broiler farms with the symptoms of respiratory tract infection was sampled (trachea, lung and kidney were sampled from affected birds suspicious for IBV and NDV infections). After RNA extraction from tissues and cDNA synthesis, the presence of IBV and NDV genome were investigated using duplex-PCR. The results showed that three of twelve examined broiler farms were positive for IBV and two farms were positive for NDV and IBV. The results revealed that the duplex-RT-PCR is a quick and sensitive procedure for simultaneously detecting IBV and NDV in birds with respiratory infections.