Detection of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis in the mesenteric lymph nodes of goats by PCR and culture

در اين مطالعه نقش كشت هاي باكتريايي و واكنش زنجيره اي پليمراز (PCR) اختصاصي عنصر الحاق شونده (IS900) در شناسايي مايكوباكتريوم اويوم زير گونه پاراتوبركلوزيس در داخل عقده هاي لنفاوي مزانتر بزها مورد مقايسه قرار گرفت. در مجموع تعداد 75 نمونه از بزهاي كشتار شده در كشتارگاه صنعتي ايلام جمع آوري گرديد. نمونه هاي منتقل شده به آزمايشگاه به صورت هموژنيزه در آمده و بر روي چهار نوع محيط كشت منتقل شدند. براي استخراج DNA از نمونه هاي هموژنيزه شده و يا كلوني هاي رشد يافته بر روي چهار نوع محيط كشت استفاده شد. با بهره گيري از PCR، عنصر الحاق شونده IS900 مايكوباكتريوم اويوم در 27 (36%) مورد از نمونه هاي عقده لنفاوي مزانتري بزها تشخيص داده شد، در حالي كه تعداد نمونه هاي رشد يافته مايكوباكتريوم اويوم بر روي محيط كشت لوانشتاين– جنسن حاوي مايكوباكتين (J) به 13 (3/17%) مورد از نمونه هاي مورد بررسي رسيد. آزمايش PCR هويت اين باكتري هاي رشد يافته را كه در مورفولوژي مايكوباكتريوم اويوم زيرگونه پاراتوبركلوزيس داشتند، را تاييد كرد. تنها شش مورد (8%) از نمونه هاي رشد داده شده بر روي محيط هرولداگ ياك منتج به رشد مايكوباكتريوم اويوم گرديد. اين مطالعه ارجحيت محيط كشت لوانشتاين- جنسن حاوي مايكوباكتين (J) را در جداسازي مايكوباكتريوم اويوم را در نمونه هاي عقده هاي لنفاوي بز نشان داد. حضور باسيل هاي قابل كشت مايكوباكتريوم اويوم در عقده هاي لنفاوي مزانتر و قابليت تست هاي مولكولي در شناسايي بزهاي عامل اين باكتري در ايلام براي اولين بار در اين مطالعه گزارش مي شود.

The efficacy of bacterial cultures and IS900-specific polymerase chain reaction (PCR) was compared for the detection of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP) from the mesenteric lymph nodes of goats. Samples were collected from 75 goats slaughtered in Ilam, in southwest of Iran. Tissue homogenates were inoculated onto four media. The genomic DNA was extracted directly from mesenteric lymph nodes and also from grown bacteria. The purified DNA was utilized as template DNA in the PCR targeting IS900 marker of MAP. IS900 PCR was compared with conventional culture methods. PCR allowed amplification of IS900 element in 27 (36%) of the mesenteric lymph nodes. In comparison, 13 (17.3%) MAP isolates were cultured on L?wenstein–Jensen + mycobactin J. Moreover, the DNA of all 13 MAP isolates was amplified by PCR, confirming the results of cultures. The number of recovered MAP on HEY+ mycobactin J was six isolates (8%). The study found that LJ + mycobactin J was a more appropriate medium for primary isolation of Map from goat tissues. This is the first report of presence of cultivable Map bacilli in mesenteric lymph nodes as well as the first documentation of molecular detection of Map directly from naturally infected goat tissues in southwest of Iran.