Author/Authors :
گودرزي، زهرا نويسنده Department of Virology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran Goodarzi , Z , سليمانجاهي، حوريه نويسنده دانشكده علوم پزشكي -دانشگاه تربيت مدرس تهران Soleymanjahi, H. , صابرفر، اسماعيل نويسنده Department of Research and Development Bayerpaul Group, Pardis Technology Park, Tehran, Iran Saberfar2 , E , تيموري ، علي نويسنده Department of Virology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran Teimoori, A , رضوي، هادي نويسنده Department of Virology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran Razavi, H
Abstract :
پروتيين غيرساختاري 4 (NSP4) روتا ويروس، پروتييني است با عملكرد چندگانه كه نقش مهمي در مورفوژنز و آثار سيتوپاتيك مرتبط با مرگ سلول دارد. با اين حال، تمامي اثرات بيولوژيكي پروتيين 4NSP به طور كامل مشخص نشده است. از آنجاييكه به دست آوردن اطلاعات بيشتر در مورد اين پروتيين نيازمند وجود آنتي بادي شناسايي كننده پروتيين است و به دليل اينكه آنتي بادي عليه اين پروتيين به صورت تجاري وجود ندارد، اين مطالعه به منظور توليد آنتي بادي پلي كلونال عليه پپتيد سنتتيك ناحيه ايمنوژنيك پروتيين NSP4 روتاويروس سويه RF با رويكرد كاربرد تشخيصي و تحقيقاتي طراحي شده است. در مطالعه حاضر توالي پپتيدي مطابق با توالي114-135 از NSP4 به وسيله گلوتارآلدييد و با استفاده از روش اتصال يك مرحله اي به پروتيين آلبومين سرم گاو (BSA) متصل گرديد. پپتيدهاي اتصال يافته به طور كامل دياليز شده و به خرگوش هاي سفيد نيوزلندي تزريق شد. آنتي سرم اختصاصي عليه پپتيد ناحيه 114-135 پروتيين NSP4 با استفاده از تست هايIF و وسترن بلات تاييد شد. نتيجه نشان داد كه به طور موفقييت آميزي آنتي بادي پلي كلونال عليه پروتيين NSP4 ايجاد شده است. در مجموع به دليل اينكه پروتيين NSP4 يك پروتيين نسبتا سمي براي سلول است، لذا بيان پروتيين با طول كامل در سيستم هاي بياني تقريبا غير عملي است. بنابراين توليد آنتي بادي اختصاصي عليه پپتيد ايمنو ژنيك ممكن است بهترين رويكرد باشد.
Abstract :
The rotavirus nonstructural protein 4 (NSP4), is a multi functional protein that play key role in both viral morphogenesis and cytopathic effect associated with cell death. However, the complete biological effect of NSP4 remains to be clarified. Since to obtain further knowledge about this protein there is a need for recognizing antibody and there is no commercial antibody against this protein, this study was designed to produce polyclonal antibodies against a synthetic immunogenic peptide of RF rotavirus NSP4 protein in order to be used as diagnostic and research tool. In the present study a peptide sequences corresponding to NSP4 114-135 conjugated to Bovine Serum Albumin (BSA) by glutaraldehyde through a single-step coupling protocol. The conjugated peptides were extensively dialyzed and injected to New Zealand white rabbits. The NSP4 114-135 peptide-specific antiserum was confirmed by both IF and Western blot analysis. The result indicated successful production of polyclonal antibody raised against native NSP4 protein. In conclusion, since NSP4 is a toxic protein for the cells, it is impracticable to express full length of NSP4 protein in expression systems. Therefore, the introducing immunogenic peptide in appropriate animal may be the best approach to produce its specific antibody.
