High-throughput direct regeneration of soybean mutant and common lines from cotyledonary node

باززايي از طريق گره لپه‌اي منجر به يك سيستم باززايي مستقيم سريع در گياهان شده است كه نياز به زمان كمتري داشته و يك روش موثر مي‌باشد. در اين تحقيق پروتوكل باززايي اندام هوايي با استفاده از ريزنمونه گره لپه‌اي به عنوان پروتوكل سريع و كارآمد براي دو رقم تجاري و يك لاين جهش يافته سويا ارزيابي گرديد. ريزنمونه‌هاي گره‌ لپه‌اي از گياهچه‌هاي 7روزه به دست آمدند كه در شرايط درون شيشه‌اي رشد يافته بودند. بعد از 28 روز، درصد باززايي و بعد از 42 روز، سطح باززايي محاسبه شد. نتايج نشان داد كه درصد باززايي و سطح باززايي لاين جهش يافته به طور معني‌داري بيشتر از دو رقم تجاري سويا، L17 و ويليامز مي‌باشد. بعد از القاي شاخه‌زايي، گياهان به محيط طويل شدن شاخه و در ادامه آنها به محيط القاي ريشه منتقل شدند. نتايج نشان داد كه درصد ريشه‌زايي به طور معني‌داري تحت تاثير ژنوتيپ قرار نمي‌گيرد. در آزمايش جداگانه ديگري براي آزمون حساسيت شاخه‌هاي باززا شده به كانامايسين، مشخص گرديد كه غلظت 150 ميلي گرم در ليتر كانامايسين براي شاخه‌هاي باززا شده از ريزنمونه گره لپه‌اي كشنده مي‌باشد. نتايج نشان داد كه كارايي باززايي لاين جهش يافته به طور معني‌داري بيشتر از دو رقم تجاري ديگر مي‌باشد. حساسيت به كانامايسين شاخه‌هاي باززا شده نشان داد كه غلظت‌هاي بالاي 150 ميلي گرم در ليتر كانامايسين مي‌تواند به عنوان عامل انتخابي در تراريزش لاين جهش يافته و دو رقم تجاري ديگر استفاده شود

Direct regenerations by using mature cotyledonary node as a explants has been shown to be time-saving and convenient strategy for micropropagation of soybean. So we have evaluated regeneration protocol through single shoot using cotyledonary node as a rapid and efficient protocol for two soybean cultivars and one mutant line. Cotyledonary nodes explants obtained from 7-days-old in vitro seedlings. After 28 days, the percent of regeneration and after 42 days, regeneration area were calculated. The results showed that percent of regeneration and regeneration area of mutant line was significantly more than two cultivars, L17 and Williams. After shoot induction, plants were transferred to shoot elongation medium followed by transferring plants to rooting medium. The results showed that the percent of rooting was not significantly affected by genotypes. In another experiment to test kanamycin sensitivity of regenerated shoots, it was found that kanamaycin with 150 mg/L concentration is lethal for regeneration of soybean shoots from cotyledonary node explants. The results showed that regeneration efficiency of mutant line was significantly more than two other cultivars. Kanamaycin sensitivity of regenerated shoots showed that kanamycin at 150 mg/L or above can be used as a selective agent for all three tested cultivars transformation