Isolation and purification of Echinococcus granulosus antigen B from hydatid cyst fluid using three different methods

کیست هیداتیک که بوسیله مرحله لاروی گونه‌­های سستود اکینوکوکوس ایجاد می­گردد، یکی از بیماری­های انگلی مشترک بین انسان و حیوان، در سراسر جهان است. اخیرا سازمان بهداشت جهانی آن را در زیرگروه بیماری­های نادیده گرفته شده­ مناطق گرمسیری (NTDs) قرار داده است. اکینوکوکوس گرانولوزوس به علت داشتن میزبانان واسط وسیع در ایران از شیوع بالایی برخوردار بوده و مطالعات اپیدمیولوژیکی که در سطح کشور صورت گرفته نشان دهنده روند رو به افزایش این آلودگی می­‌باشد بنابراین تشخیص این بیماری­ زئونوز انگلی بسیار حائز اهمیت می­باشد. امروزه به پیشنهاد سازمان بهداشت جهانی به منظور تشخیص‌­های سرولوژیکی از آنتی‌­ژن­های اختصاصی، خصوصا آنتی‌­ژن B استفاده می­شود. آنتی­ژن B یک لیپوپروتئین پلیمری است که تحت شرایط احیا به تحت واحدهایی به وزن مولکولی 12/8، 16، 24/20 کیلو دالتون تجزیه می­شود. در این مقاله از سه روش متفاوت برای جداسازی AgB از مایع کیست هیداتیک استفاده شده و این روش­ها از حیث توانایی جداسازی آنتی­ژن B مورد ارزیابی و مقایسه قرار گرفته‌­اند. در نهایت این آنتی‌­ژن به روش برادفورد سنجیده شده و صحت آن با SDS-PAGE تأیید گردید. نتایج نشان داد که در روش سوم که به منظور تغلیظ مایع کیست هیداتیک از پلی­ ا‌‌تیلن ­گلایکل 4000  استفاده گردید، بسیار موثر بوده و سبب گردید تا میزان بیشتری AgB جداسازی شود و این روش تاکنون انجام نشده بود.

Hydatid cyst, the larval stage of cestodes Echinococcus spp., is recognized as a zoonotic infection in the world. The World Health Organization (WHO) has recently classified echinococcosis in a group of neglected tropical diseases.The prevalence of Echinococcus granulosus infection is high in Iran due to the presence of various intermediate hosts in this country. Considering the rising trend of this zoonotic parasitic disease based on national epidemiological studies, diagnosis is of great significance. WHO has suggested the use of specific antigens, especially antigen B (AgB) for serological diagnostic tests. In general, AgB is a polymeric lipoprotein, which disintegrates into 8.12, 16, and 20.24 kDa subunits. In the present study, we applied three different methods for AgB isolation from hydatid cyst fluid (HCF) and compared their efficacy in AgB isolation. Finally, the protein concentration of this antigen was measured by Bradford assay and confirmed by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The results showed that the application of polyethylene glycol (PEG 4000) as a thickener agent beside purification of HCF in dialysis bag and filtering and also dialysis against acetate buffer leading to the best quantity in purified antigen B.