IgG توليد و كاربرد كونژوگه پراكسيداز آنتيبادي مونوكلونال به منظور تشخيص ELISAتوسط

عفونت هاي ويروسي عامل خسارتهاي اقتصادي بسيار زيادي در صنعت طيور هستند. توليد مواد و كيت هاي تشخيص سرولوژيك مناسب بهه مهر،، بها اسهتفاده از يهك IgG كنترل اين عفونت ها كمك خواهد نمود. هدف از مطالعهي حاضر تهيه يك آنتي بادي نشاندار شده با پراكسيداز ضد )، براي رديابي آنتي بادي هاي مر، در اليزا بود. براي اين منظور تيره سلول هيبريهدوماي توليهد كننهدهي 5B8 مر، (IgGآنتي بادي منوكلونال ضد IgG كشت داده شد و آنتي بادي منوكلونال با استفاده از يك ستون حاوي سفارز حساس شده با RPMI 1640 در محيط 5B8 آنتيبادي مونوكلونال مر، از مايع رويي سلولها خالص شد. آنتيبادي خالص شده با روش پريودات با آنزيم پراكسيداز نشاندار گرديد. آنتيبادي منوكلونال نشاندار شهده بها پراكسيداز از نظر شناسايي آنتي بادي ضد نوكلئوپروتئين ويروس آنفلونزا در اليزا با يك آنتي بادي پلهي كلونهال ترهاري مقايسهه گرديهد. بنهابر ايهن به عنوان آنتي ژن و سرم هاي تهيه شده از مر، هاي سالم و مر، هاي آلوده به ويروس آنفلهوآنزا بهه عنهوان Aنوكلئوپروتئين ويروس آنفلونزا تيپ ) بين دانسيته هاي نهوري آنتهي r =0.972آنتي بادي اوليه مورد استفاده قرار گرفتند. نتايج بدست آمده نشان داد كه يك همبستگي قوي و مستقيم ( مر، و آنتي بادي نشاندار شده وجود دارد. در نتيره آنتي بادي منوكلونال نشاندار شده براي طراحي كيتهاي تشخيص سرمي IgGبادي تراري ضد طيور مناسب مي باشد.

Viral infections are the cause of great economic losses in the poultry industry. Development of appropriate reagents and serological diagnostic kits will help to control these infections. The aim of this study is to prepare a peroxidase labeled antichicken IgG using a MAb (5B8) against chicken IgG, for detection of chicken antibodies in ELISA. Hybridoma cells producing the MAb 5B8 were cultured in RPMI 1640 medium and the MAb was purified from the cells supernatant using a sepharose matrix column, sensitized with chicken IgG. The purified MAb was labeled with Horseradish peroxidase (HRP) by periodate treatment. The peroxidase labeled MAb was compared with a commercial polyclonal product for detection of chicken antibodies against avian influenza virus nucleoprotein in ELISA. Therefore, type A recombinant nucleoprotein influenza virus was used as the antigen and chicken sera prepared from healthy and influenza virus infected chickens were used as primary antibodies. The results showed that there is a strong and direct correlation (r =0.972) between the optical densities of a commercial antichicken IgG and the prepared conjugate. In conclusion, the conjugated MAb is appropriate for the development of serological diagnostic tests for poultry infections.