جداسازي و شناسايي مولكولي مايكوپلاسما اكوئي جنيتاليوم از دستگاه تناسلي اسب سانان در شمال هند

اگر چه به مايكوپلاسما اكوئي جنيتاليوم در مشكلات توليد مثلي اسب سانان اشاره شده است، اما به دليل فقدان آزمايش‌هاي تشخيصي، اختصاصي شيوع آن تا حد زيادي ناشناخته است. به منظور بر طرف كردن اين محدوديت، جفت پرايمرهاي اختصاصي گونه را تكامل بخشيده و بهينه‌سازي كرده‌ايم كه توالي‌هاي ژن rpoB مايكوپلاسما اكوئي جنيتاليوم (RNA پليمراز تحت واحد B) را مورد هدف قرار مي‌دهند. ويژگي روش واكنش زنجيره‌اي پليمراز تكامل يافته در اين مطالعه با استفاده از 12 جدايه مزرعه‌اي شامل سويه مايكوپلاسما اكوئي جنيتاليوم و ديگر گونه‌هاي مايكوپلاسما تعيين شد. در مطالعه مزرعه‌اي، تعداد 122 نمونه شامل 50 نمونه باليني و 72 نمونه تصادفي جمع‌آوري شده از ماديان و نريان به منظور شناسايي مايكوپلاسما اكوئي جنيتاليوم در دستگاه تناسلي اسب سانان با آزمون واكنش زنجيره‌اي پليمراز اختصاصي گونه تحت بررسي قرار گرفتند. واكنش زنجيره‌اي پليمراز اختصاصي گونه مايكوپلاسما اكويي جنيتاليوم 13/22% از نمونه‌ها را مثبت شناسايي كرد، در حالي كه 01/9% از نمونه‌ها با تكنيك قراردادي كشت مثبت بودند. واكنش زنجيره‌اي پليمراز فراهم شده در اين مطالعه توانست براي تشخيص سريع، اختصاصي و دقيق سويه‌هاي مايكوپلاسما اكوئي جنيتاليوم مورد استفاده قرار گيرد. طبق اطلاعات نويسندگان، اين اولين گزارش راجع به تكامل و ارزيابي واكنش زنجيره‌اي پليمراز اختصاصي گونه براي شناسايي مايكوپلاسما اكوئي جنيتاليوم مي‌باشد.

Although Mycoplasma equigenitalium has been implicated in equine reproductive problems, its prevalence is largely unexplored due to the lack of specific diagnostic tests. To address this limitation, the authors developed and optimized species specific primer pairs that target M. eguigenitalium rpoB (RNA polymerase B subunit) gene sequences. The specificity of the PCR assay developed in this study was determined using 12 field isolates including the type strain of M. equigenitalium and other Mycoplasma species. In the field study, a total of 122 mare and stallion sles comprising of 50 clinical and 72 random sles were subjected to speciesspecific PCR assay to detect M. equigenitalium in equine genital tracts. Mycoplasma equigenitalium (MEG) species specific PCR detected 22.13% positive sles however, only 9.01% of the sles were found to be positive using the conventional culture technique. The PCR established in this study could be used for rapid, specific and accurate diagnosis of M. equigenitalium strains. To the authors’ knowledge, this is the first report addressing the development and evaluation of species specific PCR to detect M.equigenitalium.