Author/Authors :
Bu، R. E. نويسنده College of Life Science,Inner Mongolia University for Nationalities,Tongliao,China بو, ري اي. , Wang، J. L. نويسنده Shandong Binzhou Animal Science and Veterinary Medicine Academy,Binzhou,China وانگ, جين ليانگ , DebRoy، C. نويسنده E. coli Reference Center,Department of Veterinary and Biomedical Sciences,Pennsylvania State University,Pennsylvania,USA دِب روي, چيتريتا , Wu، J. H. نويسنده College of Life Science,Inner Mongolia University for Nationalities,Tongliao,China وو, جين هوآ , Xi، L. G. W. نويسنده College of Life Science,Inner Mongolia University for Nationalities,Tongliao,China اِكسي, لين گااُ وا , Liu، Y. نويسنده College of Life Science,Inner Mongolia University for Nationalities,Tongliao,China لييو, يان , Shen، Z. Q. نويسنده Shandong Binzhou Animal Science and Veterinary Medicine Academy,Binzhou,China شِن, ژي كيانگ
Abstract :
ژن كد كننده پروتئين سطحي ايمني‌زاي قوي حفاظتي استرپتوكوكوس آگالاكتيه با استفاده از واكنش زنجيره‌اي پليمراز تكثير و در حامل بيان پروكاريوتي pET32a كلون شده و به صورت يك پروتئين نوتركيب در E. coli BL21 (DE3) بيان گرديد. يك روش سنجش ايمونوسوربنت متصل به آنزيم (الايزا) غير مستقيم با استفاده از پروتئين خالص شده Sip به عنوان آنتي ژن جهت كوتينگ توسعه يافت كه مي‌توانست آنتي بادي اختصاصي استرپتوكوكوس آگالاكتيه را در سرم‌ها شناسايي كند. آنتي ژن جهت كوتينگ در غلظت μg/ml 125/3، سرم رقيق شده به نسبت 1:160، و آنتي بادي ثانويه كنژوگه شده با HPR در غلظت 1:400 موثرترين بودند كه نتيجه مثبتي را به دنبال داشتند. الايزا ويژگي بالايي براي استرپتوكوكوس آگالاكتيه نشان داد كه ممكن است براي رديابي پاتوژن در موارد ورم پستان، براي مطالعات اپيدميولوژيكي و نظارتي استفاده گردد.
Abstract :
The sip gene encoding for a conserved highly immunogenic surface protein of Streptococcus agalactiae was lified using polymerase chain reaction (PCR) and subcloned into prokaryotic expression vector pET32a (+) and expressed as a recombinant protein in E. coli BL21 (DE3). An indirect enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) was developed using the purified Sip protein as a coating antigen, which could identify S. agalactiae specific antibody in sera. The coating antigen at a concentration of 3.125 μg/ml, serum diluted to 1:160, and HRP conjugated secondary antibody concentration at 1:4000 was found to be most effectivein exhibiting positive result. The ELISA was found to be highly specific for S. agalactiae that may be used for the detection of the pathogen in mastitis cases, for epidemiological studies and for surveillance.
