Frequency of null allele of Human Leukocyte Antigen-G (HLA-G) locus in subjects to recurrent miscarriage

مقدمه: آنتی ژن G لکوسیت انسانی ((HLA-G جزو خانواده I غیرکلاسیک بوده و توسط سلول­هایExtravillous Cytotrophoblast  به میزان زیادی بیان می­شود. در صورت حذف یک جفت باز در ژن آن، عملکرد آن می­تواند توسط ایزوفرم­های دیگر مانند HLA-G2 جبران شود. بررسی فراوانی آلل نول در افراد با سابقه سقط مکرر می­تواند نتیجه مفید در درک رابطه بین فراوانی این آلل و سقط­های مکرر در جمعیت ها ارائه دهد. هدف: در این مطالعه، هدف ارائه فراوانی آلل نول HLA-G* 0105N و بررسی ارتباط بالقوه این فراوانی با کاهش بیان آن در افراد مبتلا به سقط مکرر بود. مواد و روش­ها: از روش وسترن بلاتینگ برای بررسی میزان بیان پروتئین HLA-G استفاده شد. برای بررسی فراوانی آلل نول HLA-G* 0105N در افراد مبتلا به سقط مکرر، از روش PCR-RFLP استفاده گردید. اگزون 3 ژن HLA-G با روش PCR تکثیر گردید. بدنبال آن با استفاده از آنزیم PpuM-1 محصول PCR برش داده شده و بر روی ژل آگارز الکتروفورز انجام و سپس آنالیز گردید. نتایج: برش با آنزیم محدودکننده وجود 10% هتروزیگوس برای آلل نول HLA-G* 0105N در افراد را نشان داد. همچنین نتایج وسترن بلاتینگ کاهش در بیان ژن HLA-G در بافت جفت افراد مبتلا به سقط مکرر در مقایسه با افراد با تولد نرمال را نشان داد. نتیجه­گیری: فراوانی حالت هتروزیگوس آلل نول HLA-G* 0105N در افراد مبتلا به سقط مکرر جنین بالاست. نسبت جهش در این افراد، وجود یک ارتباط بین سقط مکرر و فراوانی جهش در آلل مذکور را پیشنهاد می کند.

Background: Human leukocyte antigen-G (HLA-G) is a non-classical class I molecule highly expressed by extravillous cytotrophoblast cells. Due to a single base pair deletion, its function can be compensated by other isoforms. Investigating the frequency of null allele in Recurrent Miscarriage (RM) subjects could be useful in understanding the relationship between frequency of this allele and RM in a given population.  Objective: This study aimed to determine the frequency of HLA-G*0105N null allele and its potential association with down-regulation of HLA-G in subjects with RM.  Materials and Methods: Western blotting was used to assess the level of HLA-G protein expression. For investigating the frequency of HLA-G*0105N null allele in RM subjects, PCR-RFLP method was used. Exon 3 of HLA-G gene was amplified by polymerase chain reaction (PCR). Subsequently, PpuM-1 enzyme was employed to digest the PCR products and fragments were analyzed using gel electrophoresis.  Results: Digestion using restriction enzyme showed the presence of heterozygous HLA-G*0105N null allele in 10% of the test population. Western blotting results confirmed the decrease in expression of HLA-G in the placental tissue of subjects with RM compared to subjects who could give normal birth.  Conclusion: The frequency of heterozygous HLA-G*0105N null allele was high to some extent in subjects with RM. The mutation rate in subjects suggested that there is a significant association between RM and frequency of mutations in this allele.