The effects of Salvia officinalis L. on granulosa cells and in vitro maturation of oocytes in mice

مقدمه: مریم گلی (Salvia officinalis L) جهت درمان از زمان­های گذشته استفاده می­شده است اما درباره اثرات این گیاه بر روی دستگاه تناسلی سالم اطلاعات کمی وجود دارد. بررسی اثرات سمی مریم گلی بر روی سلول­های گرانولوزا و بلوغ اووسیت­ها مورد بررسی قرار گرفت. هدف: در تحقیق حاضر اثرات این گیاه بر روی سلول­های گرانولوزا و اووسیت­های طبیعی بررسی می­شود. موارد و روش­ها: سلول­های گرانولوزا و اووسیت­ها از تخمدان­های تحریک شده برای تخمک­گذاری موش­های نابالغ استخراج شدند. 24 ساعت بعد سلول­ها با دوز­های 0، 10، 50 ،100، 500 و 1000 میکرو­گرم در هر میلی­لیتر عصاره هیدروالکلی مریم گلی تیمار شدند. زیستایی، تراکم کروماتین، سطح استردیول و پروژسترون، میزان لیپید، اپوپتوز و فعالیت الکالین فسفاتاز سلول­های گرانولوزا اندازه­گیری شد. مراحل مختلف بلوغ تخمک­ها شامل ژرمینال وزیکول (GV)، گسستگی ژرمینال وزیکول (GVBD) و متافاز  (MII)بررسی شد. نتایج: نتایج بیانگر سمیت دوزهایμg/ml  500 و 1000 عصاره بود. اکثر سلول­های گرانولوزا در دوز μg/ml 100 در مراحل اولیه اپوپتوز بودند اما در دوز μg/ml 500 مرگ سلولی مشاهده شد. سطح پروژسترون در دوزμg/ml  100 و بالاتر از آن کاهش یافت ولی سطح استردیول و فعالیت الکالین فسفاتاز در این دوزها افزایش نشان داد. قطرات لیپیدی موجود درسلول­های گرانولوزا در کلیه دوزها بخصوص μg/ml 500 و 1000 از کاهش چشمگیری برخوردار بود. هسته و سیتوپلاسم اووسیت­ها در تمامی دوزها به سمت متراکم شدن پیش رفت و از شدت میوز آن­ها کاسته شد. نتیجه­ گیری: دوزهای بالای عصاره هیدروالکلی مریم گلی زیستایی، تکثیر، ترشح سلول­های گرانولوزا و رسیدگی اووسیت­ها را مهار می­کند.  

Background: Salvia officinalis L. has been used since ancient times but there are little data about effects of this herb on normal reproductive cells. Objective: To investigate the toxicity effects of Salvia officinalis L. on granulosa cells (GCs) and maturation of oocytes. Materials and Methods: GCs and oocytes were extracted from superovulated ovaries of immature mice. The cells were treated with concentrations of 10, 50, 100, 500, and 1000 μg/ml of Salvia officinalis hydroalcoholic extracts and compared with the control culture. Bioviability, chromatin condensation, estradiol and progesterone concentrations, lipid synthesis, apoptosis, and alkaline phosphatase activity of GCs were measured. In vitro maturation of oocytes by determination of different maturation stages of oocytes including germinal vesicle, germinal vesicle breaks down, and metaphase II were examined. Results: The results revealed that 500 and 1000 μg/ml concentrations of Salvia officinalis L. were toxic. The most of the GCs were in the early stages of apoptosis in 100 μg/ml treated culture and cell death happened with 500 μg/ml treatment. Progesterone concentration was reduced in 100 μg/ml and higher doses but estradiol concentration and alkaline phosphatase showed opposite effects. The lipid droplets content of GCs reduced significantly in all groups especially in 500 and 1000 μg/ml. Finally, oocyte’s nucleus and cytoplasm showed a high level of condensation, and meiosis rate reduced in all treated cultures. Conclusion: Our findings suggested that higher dose of Salvia officinalis hydroalcoholic extracts inhibits, oocyte maturation, GCs bioviability, proliferation, and secretion.