Endometrial mesenchymal stem stromal cells in mature and immature sheep: An in vitro study

مقدمه: سلول­های بنیادی مزانشیمی استرومال اندومتریوم (EnMSC) برای عملکرد، ترمیم و بازسازی رحم حیاتی هستند. هدف: این پژوهش روش جداسازیEnMSC  ها را معرفی کرده و خصوصیات EnMSC ها را در میش­های بالغ و نابالغ مقایسه نموده است. موارد و روش­ها: نمونه­های بافت اندومتریوم از رحم 10 میش از کشتارگاه جمع­آوری شد. سلول­های اندومتر رحم با استفاده از انکوباسیون سرما و سپس خرد کردن بافت و درمان با کلاژناز نوع I از بافت جدا شدند. سلول­های جدا شده در محیط کشت سلولی کشت داده شده و سلول­های چسبیده به فلاسک­ها به عنوان EnMSC ها جمع­آوری و دوباره کشت داده شدند. برای شمارش سلول­ها، زمان دو برابر شدن جمعیت (PDT) اندازه­گیری شد و 104×2/2 سلول در پاساژ 4 در پلیت­های کشت 24 چاهکی قرار داده شدند تا نمودارهای رشد سلول­های جداسازی شده مقایسه شود. واکنش زنجیره­ای پلی­مراز رونویسی معکوس (RT-PCR) برای شناسایی نشانگرهای CD34 و CD73 انجام شد. پتانسیل استخوانی شدن و چربی شدن سلول­های جدا سازی شده با استفاده از آزمون تمایز سلولی انجام شد. نتایج: EnMSC ها به فلاسک­ها چسبیدند و شکل دوکی به خود گرفتند. بر اساس یافته ­های شمارش سلولی و نمودارهای رشد، EnMSC ها در میش­های نابالغ به طور معنی­ داری بیشتر از گوسفندان بالغ تکثیر شدند. PDT مربوط بهEnMSC  ها در میش­های نابلغ در حدود 21 ساعت بود درحالیکه این زمان در گوسفندان بالغ 2 برابر بیشتر (45 ساعت) بود. آنالیزهای RT-PCR نشان داد کهEnMSC  ها برای CD73 مثبت و برای CD34 منفی بودند. EnMSC ها به استئوبلاست و آدیپوسیت تمایز داده شدند. نتیجه­گیری: بر اساس خصوصیات سلول­های بنیادی مزانشیمی تایید شده در EnMSC ها، آنها می­توانند به عنوان نامزدی در سلول درمانی و پزشکی ترمیمی استفاده شوند.

Background: Endometrial mesenchymal stem stromal cells (EnMSCs) are critical for uterine function, repair, and regeneration. Objective: This study introduced isolation technique of EnMSCs and compared the characteristics of EnMSCs in mature and immature ewes. Materials and Methods: Endometrial tissue samples from the uterus of 10 ewes were collected from the slaughterhouse. Endometrial cells were isolated from tissue using cold incubation and then chopping and treating was performed with collagenase type I. Isolated cells were cultured in cell culture medium and then attached cells to flasks were harvested as EnMSCs and subcultured. To enumerate the cells, the population doubling time (PDT) was determined and 2.2×104 cells in passage 4 were seeded into 24-well culture plates to compare the growth curves of isolated cells. Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) was performed for detection of CD34 and CD73 markers. The osteogenic and adipogenic potential of isolated cells were determined using differentiation tests. Results: EnMSCs adhered to the flasks and displayed spindle-shape. Based on findings of the cell count and the growth curves, the EnMSCs growth was significantly more prominent in immature ewes in comparison to mature sheep. The PDT of EnMSCs in immature ewes was about 21 hr whereas this time period was two times higher (45 hr) in mature sheep. RT-PCR analyses of EnMSCs were positive for CD73 and negative for CD34. EnMSCs were differentiated into osteoblasts and adipocytes. Conclusion: Based on mesenchymal stem cells characters confirmed in EnMSCs, they can be a candidate for cell therapy and regenerative medicine.