A reverse transcriptase-loop mediated isothermal amplification assay (RT-LAMP) for rapid detection of bovine viral diarrhea virus 1 and 2

ویروس اسهال ویروسی گاو یک عامل بیماریزا برای گاوها می­باشد و دارای اهمیت اقتصادی در همه دنیا است. این عامل باعث تحمیل هزینه­های فراوان به صنعت دامپروری می­شود. روش تک مرحله­ایی رونوشت برداری معکوس و تکثیر هم دما به واسطه لوپ (RT-LAMP) برای شناسایی سریع و موثر ویروس اسهال ویروسی گاو  طراحی گردید. چهار پرایمر بر اساس ناحیه حفاظت شده غیر ترجمه­ایی انتهای΄5 (5΄UTR) ژنوم ویروس اسهال ویروسی گاو  برای تشخیص شش محل مختلف روی RNA هدف طراحی گردید. هشتاد نمونه خون از دام­های مشکوک به اسهال ویروسی گاو جمع آوری و به طور همزمان با دو روش RT-PCR وRT-LAMP  تست شدند. 24 نمونه از این تعداد با روشRT-LAMP مثبت شدند. درحالیکه با روش RT-PCR بیست نمونه مثبت شدند. حد شناسایی برای روش RT-LAMP تقریبا PFU/mL70 تخمین زده شد. مقایسه روش RT-PCR با RT-LAMP نشان داد که روش جدید طراحی شده به عنوان یک روش حساس و اختصاصی توانایی تشخیص این ویروس در نمونه های کلینیکی را دارد.

Bovine viral diarrhea virus (BVDV) is a pathogen that infects cattle, and is globally important. It causes substantial financial losses to the livestock industry. In the current study, a one-step reverse transcriptase-loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP) assay was set up for rapid and efficient detection of BVDV. For this purpose, four primers were designed to recognize six distinct regions on the target RNA based on a highly conserved sequence in the 5΄ UTR of the BVDV genome. Eighty blood specimens were collected from bovines suspected to suffer from BVDV infection, and were tested in parallel by RT-LAMP and RT-PCR. Twenty four of these samples were positive by RT-LAMP, while twenty were positive by RT-PCR. The RT-LAMP detection limit was estimated to be approximately 70PFU /mL of virus. Comparison of RT-PCR with RT-LAMP in this study revealed the recent developed RT-LAMP a highly sensitive and specific for BVD virus detection in the clinical samples.