انتاج انزيم البروتيز من عزلات بكتيريا الزوائف الزنجارية وتنقيتة ودراسة بعض خصائصة

نفذت هذه الدراسة لغرض عزل وتشخيص البكتريا المحللة للبروتين والمنتجة لانزيم البروتيز وتشخيصها من بعض العينات السريرية للمرضى المراجعين لمستشفيات مدينة الرمادي ، وتحديد الظروف المثلى لانتاج انزيم البروتيز وتنقيته ودراسة خصائص الانزيم والظروف المثلى لعمله. واستعمل للعزل اوساط زرعية مثل وسط اكار الماكونكي ووسط الجكليت اكار واكار الدم ووسط الجيلاتين الصلب فضلا عن الفحوصات المورفولوجية والكيموحيوية ، واختبرت قابلية العزلات على انتاج انزيم البروتيز باستعمال وسط الجيلاتين الصلب ووسط مسحوق قرون الاغنام ووسط مسحوق كوالح الذرة وتميزت العزلات بقدرتها على انتاج انزيم البروتيز مع وجود اختلاف في كفاءة هذه العزلات ، انتخبت العزلة المحلية p. aeruginosa المعزولة من الحروق لانها الاكفا في انتاج الانزيم. واختبرت كفاتها في مقاومة المضادات الحيوية ، واظهرت العزلة مقاومة لاغلب المضادات الحيوية المستعملة في الدراسة ، ولاسيما مضادات البيتا لاكتام والتتراسايكلينات ومجموعة الامينوكلايكوسيد ، الا انها كانت حساسة لمضاد الببراسلين . وحددت الظروف المثلى لانتاج انزيم البروتيز ، اذ كان الوسط الزرعي مسحوق قرون الاغنام ، ذو الاس الهيدروجيني (7) ، والملقح بـ(10 6 x 1) خلية / مللتر مع الحضن لمدة (24) ساعة في (32) مْ هي افضل الظروف لانتاج الانزيم . واظهرت الخطوات المتسلسلة تنقية انزيم البروتيز المنتج من العزلة المحليـة P. aeruginosa بالترسيب بملح كبريتات الامونيوم بنسبة اشباع تراوحت بين(80-20%) وان النسبة 60% هي الافضل في الترسيب اذ اعطت فعالية نوعية قدرها 32.03 وحدة/ملغم بعدد مرات تنقية 1.60مرة وحصيلة انزيمية33.69%, وادى امرار المحلول الانزيمي على عمود المبادل الايوني DEAE-Cellulose الى زيادة نقاوة الانزيم اذ ارتفعت الفعالية النوعية الى 57.68 وحدة/ملغم وعدد مرات تنقية الى 2.89مرة وبحصيلة انزيمية 35%. جمعت الاجزاء التي اظهرت فعالية انزيمية عالية واخضعت لعملية الفصل بطريقة الترشيح الهلامي بعمود هلام Sephadex-G200اعطت هذه الخطوة فعالية نوعية 34.87وحدة/ملغم وعدد مرات تنقية 1.74مرة وحصيلة انزيمية مقدارها 32.16%.وبينت نتائج توصيف الانزيم ان الرقم الهيدروجيني الامثل ودرجة الحرارة المثلى لفعاليته بلغت 6.5 و 45 م على التوالي, واعطى الانزيم اعلى فعالية انزيمية عند حضنه عند الرقم الهيدروجيني ودرجة الحرارة اعلاه.