ﺗﺸﺨﯿﺺ ﺧﻤﯿﺮة Cryptococcus neoformans اﻟﻤﻌﺰوﻟﺔ ﻣﻦ ﻣﺮﺿﻰ اﻟﺴﺮﻃﺎن ﻓﻲ ﻣﺤﺎﻓﻈﺔ اﻟﻨﺠﻒ اﻻﺷﺮف ﺑﺎﺳﺘﺨﺪام ﺗﻘﻨﯿﺔ Nested PCR.

ھﺪف اﻟﺪراﺳﺔ: ﺗﮭﺪف ھﺬه اﻟﺪراﺳﺔ ﻟﻌﺰل ﺧﻤﺎﺋﺮ Cryptococcus neoformans ﻣﻦ ﻣﺮﺿﻰ اﻟﺴﺮﻃﺎن وﺗﺸﺨﯿﺼﮭﺎ ﺟﯿﻨﯿﺎً ﺑﺎﻻﻋﺘﻤﺎد ﻋﻠﻰ ﻣﻨﻄﻘﺔ اﻟﻨﺴﺦ اﻟﺪاﺧﻠﻲ ﻟﻠﺤﺎﻣﺾ اﻟﻨﻮوي اﻟﺮاﯾﺒﻮﺳﻮﻣﻲ ﻣﻨﻘﻮص اﻻوﻛﺴﺠﯿﻦ Ribosomal internal .Nested PCR ﺑﺘﻘﻨﯿﺔ CN5-CN6و ITS_CN4 ﺑﺎﺳﺘﻌﻤﺎل زوﺟﻲ اﻟﺒﺎدﺋﺎت transcript spacer DNA اﻟﻤﻨﮭﺠﯿﺔ:ﻋﺰﻟﺖ ھﺬه اﻟﺨﻤﯿﺮة ﻣﻦ ﻣﺮﺿﻰ اﻟﺴﺮﻃﺎن اﻟﺮاﻗﺪﯾﻦ واﻟﻤﺮاﺟﻌﯿﻦ ﻓﻲ ﻣﺴﺘﺸﻔﯿﺎت ﻣﺤﺎﻓﻈﺔ اﻟﻨﺠﻒ اﻻﺷﺮف وﻣﻦ ﻛﻼ اﻟﺠﻨﺴﯿﻦ وﺑﺎﻋﻤﺎر ﻣﺨﺘﻠﻔﺔ ﺗﺮاوﺣﺖ ﻣﻦ (45-1) ﺳﻨﺔ ﺣﯿﺚ ﺷﺨﺼﺖ ﺗﻠﻚ اﻟﺨﻤﺎﺋﺮ ﻣﻈﮭﺮﯾﺎ ﺑﺎﻟﻄﺮق اﻟﺘﻘﻠﯿﺪﯾﺔ واﻻﺧﺘﺒﺎرات اﻟﻜﯿﻤﻮﺣﯿﻮﯾﺔ و ﺗﻢ ﺗﺎﻛﯿﺪ ﻋﺎﺋﺪﯾﺘﮭﺎ ﺑﺎﺳﺘﺨﺪام ﺟﮭﺎز VIEK2. ﻣﻦ ﻣﺠﻤﻮع C. ﻋﺰﻟﺔ15ﻣﻨﮭﺎ Cryptococcus ﻋﺰﻟﺔ ﻣﻦ ﺧﻤﯿﺮة 21 ﻋﯿﻨﺔ ﻣﺎﺧﻮذة ﻣﻦ ﻣﺮﺿﻰ اﻟﺴﺮﻃﺎن ﺗﻢ ﻋﺰل57 neoformans و5ﻋﺰﻻت C. albidus وﻋﺰﻟﺔ واﺣﺪة C. laurentii ,اﺳﺘﻌﻤﻠﺖ ﻃﺮﯾﻘﺔ Nested PCR ﻟﻐﺮض ﺗﺸﺨﯿﺺ اﻟﺨﻤﺎﺋﺮ اﻟﻤﻌﺰوﻟﺔ وراﺛﯿﺎً ﺑﺎﺳﺘﺨﺪام زوﺟﯿﻦ ﻣﻦ اﻟﺒﺎدﺋﺎت )CN4-ITS( و CN5-CN6)( ﻟـ21 ﻋﺰﻟﺔ ﻣﻦ ﺧﻤﺎﺋﺮ Cryptococcus اﻋﺘﻤﺎداً ﻋﻠﻰ ﺗﻀﺨﯿﻢ ﻣﻨﻄﻘﺔ ITSوﻗﺪ اﻇﮭﺮت ﻧﺘﺎﺋﺞ اﻟﺘﻀﺨﯿﻢ ﺑﺎﺳﺘﺨﺪام زوج اﻟﺒﺎدئ ) CN4,ITS ( ﺣﺰﻣﺔ ﺑﺤﺠﻢ ﺟﺰﯾﺊ415 زوج ﻗﺎﻋﺪي وﻟﻜﻦ ﻷرﺑﻌﺔ ﻋﺸﺮ ﻋﺰﻟﺔ ﻓﻘﻂ ﻣﻦ C.neoformans ﻣﻦ ﻣﺠﻤﻮع 15 ﻋﺰﻟﺔ اﻣﺎ اﻟﻨﻮﻋﯿﻦ اﻵﺧﺮﯾﻦ ﻓﺈﻧﮭﺎ ﻟﻢ ﺗﻈﮭﺮ اي ﺣﺰﻣﺔ. اﻣﺎ زوج اﻟﺒﺎدئ )CN6-CN5( ﻓﻘﺪ اﻋﻄﻰ ﺣﺰﻣﺔ وﺑﺤﺠﻢ ﺟﺰﯾﺌﻲ 116 زوج ﻗﺎﻋﺪي ﻟـ 20ﻋﺰﻟﺔ ﻣﺸﺘﺮﻛﺔ ﺑﯿﻦ اﻷﻧﻮاع اﻟﺜﻼﺛﺔ . وﻗﺪ ﺗﻢ اﺳﺘﺨﺪام اﻟﺒﺮﻧﺎﻣﺞ اﻻﺣﺼﺎﺋﻲ spss ﻟﺤﺴﺎب اﻟﻨﺘﺎﺋﺞ اﻟﻨﮭﺎﺋﯿﺔ ﻟﻠﺪراﺳﺔ. اﻟﻨﺘﺎﺋﺞ: ﻛﺎﻧﺖ ﺧﻤﯿﺮة C.neoformans اﻻﻛﺜﺮ ﺗﻜﺮاراً ﻣﻦ ﺣﯿﺚ اﻟﻌﺰﻻت ﻣﻘﺎرﻧﺔ ﺑﺎﻻﻧﻮاع اﻻﺧﺮى .واﻋﻄﺖ ﻃﺮﯾﻘﺔ Nested PCR اﻓﻀﻞ اﻟﻨﺘﺎﺋﺞ ﺑﺎﻟﺘﺸﺨﯿﺺ واﻟﺘﻘﺎرب اﻟﻮراﺛﻲ ﺑﯿﻦ اﻻﻧﻮاع وان ﻧﺘﺎﺋﺞ اﻟﺘﺸﺨﯿﺺ ﺑﺎﺳﺘﺨﺪام ﺟﮭﺎز VITEK2 Compact system ﻛﺎﻧﺖ ﻣﻄﺎﺑﻘﺔ ﻟﻠﻨﺘﺎﺋﺞ اﻟﻤﺴﺘﺤﺼﻞ ﻋﻠﯿﮭﺎ ﻣﻦ ھﺬه اﻟﻄﺮﯾﻘﺔ ﺑﺎﺳﺘﺨﺪام زوج اﻟﺒﺎدﺋﺎت )CN6-CN5( اﻛﺜﺮ ﻣﻨﮭﺎ ﺑﺎﺳﺘﺨﺪام اﻟﺰوج اﻻول ( CN4,ITS ).اﻻﺳﺘﻨﺘﺎﺟﺎت: اﻏﻠﺐ اﻻﺻﺎﺑﺎت ﺑﺎﻟﺨﻤﺎﺋﺮ اﻟﻤﺴﺘﺨﻔﯿﺔ ﻛﺎﻧﺖ ﻓﻲ اﻟﻤﺮﺿﻰ ﻣﻦ ﺳﻜﺎن اﻟﻤﺪﯾﻨﺔ وﻗﺪ ﻛﺎﻧﺖ اﻟﻔﺌﺔ اﻟﻌﻤﺮﯾﺔ 30-16 ﺳﻨﺔ اﻻﻛﺜﺮ ﻣﻦ ﺣﯿﺚ ﻋﺪد اﻻﺻﺎﺑﺎت وﺑﻨﺴﺒﺔ (42.86%) . اﻟﺘﻮﺻﯿﺎت :اﻋﺘﻤﺎد ﺗﻘﻨﯿﺔ Nested PCR ﻓﻲ اﻟﺘﺸﺨﯿﺺ ﻛﻮﻧﮭﺎ ﻃﺮﯾﻘﺔ دﻗﯿﻘﺔ ﻓﻲ ﺗﺤﺪﯾﺪ اﻟﻨﻤﻂ اﻟﺠﯿﻨﻲ واﻟﺘﺼﻨﯿﻒ ﻟﺘﻠﻚ اﻟﺨﻤﯿﺮة. اﻟﻜﻠﻤﺎت