عزل و توصيف بكتريا E. coli O157:H7 من اللحم و الجبن و الكشف عن جينات Stx1 و Stx2 و hlyA و eaeA باستخدام تقنية Multiplex PCR

تم جمع 189 عينة غذائية مختلفة اشتملت على 74 عينة لحم بقري مفروم ، 115 عينة جبن ابيض محلي من ثلاث مناطق من بغداد (الصدرية ، ابو غريب ، الفضيلية) ، اجري المسح لجميع العينات للتقصي عن وجود بكتريا Escherichia coli من النمط المصلي O157:H7 و تمييزها عن باقي سلالات ايشيريشيا القولون غير المخمرة للسوربتول (NSF E.coli) Non-Sorbitol fermenting Escherichia coli زرعت العينات على وسط اغنائي سائل (Enrichment broth) و حضنت بدرجة حرارة 41.5 م لمدة 6 ساعات تبعها الزرع على وسط اكار الماكونكي الحاوي على سكر السوربتول و المضاف اليه مضاد الحيوية السفكسيم و ملح التيلورايت (CT-SMAC) (Cefixime Tellurite - Sorbitol MacConkey Agar). تم الحصول على 66 عزلة بكتيرية غيرمخمرة للسوربتول شخص منها 13 عزلة ايشيريشيا القولون ( 6 عزلات من اللحم و 7 عزلات من الجبن) وذلك باستخدام الاختبارات الكيموحيوية التقليدية و نظام التشخيص Api20E و التي لم تعطِ نتائج كافية تمكن من تفريق النمط المصلي O157:H7 بشكل نهائي عن باقي عزلات NSF E.coli اجريت اربع اختبارات كيموحيوية خاصة لتشخيص النمط المصلي O157 و تمييزه عن باقي انواع البكتريا غير المخمرة الانتيروهيمولايسين) حيث اظهرت النتائج عائدية عزلتان فقط الى المجموعة المصلية O157 ( عزلة واحدة من عينات اللحم و عزلة واحدة من عينات الجبن) ، تم اجراء فحص التلازن بحبيبات اللاتكس المرتبطة بالاجسام المضادة للمستضدين O157 و H7 و اعطت العزلتان نتيجة ايجابية . شخصت العزلات باستعمال تقنية التفاعل التضاعفي المتعدد لسلسلة الدنا (MPCR ) (Multiplex Polymerase Chain Reaction) للكشف عن وجود او غياب اربعة انواع من الجينات هي eaeA ، hlyA ، Stx2 ، Stx1 المشفرة لعوامل ضراوة رئيسية لتشخيص بكتريا E.coliO157:H7 المعزولة و ذلك باستخدام بادئات نوعية تستهدف مواقع متخصصة للجينات الهدف المذآورة انفا و في تفاعل واحد ، واظهرت النتائج وجود تباين في المحتوى الجيني بين عزلات بكتريا E. coli O157:H7 فقد احتوت احدى العزلات (من اللحم) على الجينات الاربعة بينما احتوت العزلة الثانية (من الجبن) على اثنين من الجينات فقط هي .hlyA و Stx1.