استخلاص وتنقية وتوصيف وربط ببسين الدجاج واستعماله في تحضير متحلل بروتيني

هدفت الدراسة الحالية إلى استخلاص انزيم الببسين EC : 3.4.23.1 من بعض المصادر الحيوانية و تنقيته و دراسة بعض صفاته و ربطه بو استعماله في التطبيقات العملية في مجال الصناعات الغذائية، استخلص الأنزيم من معدة ثلاثة أنواع من الحيوانات (الأغنام، الدجاج، سمك النويبي) باستعمال خمسة محاليل استخلاص تضمنت الماء المقطر، محلول كلوريد الصوديوم بتركيز 10 %، محلول كلوريد الصوديوم بتركيز 6 % الحاوي على 2 % حامض بوريك، محلول فوسفات الصوديوم الدارئ بتركيز 0.1 مولاري و رقم هيدروجيني 7.3 و محلول Tris-acetic acid بتركيز 0.4 مولاري برقم هيدروجيني 7.6 لغرض تحديد أفضل مصدر للأنزيم و أفضل محلول استخلاص و قد وجد أن معدة الأغنام كانت أفضل مصدر للحصول على الأنزيم و أن محلول كلوريد الصوديوم 6 % الحاوي على 2 % حامض البوريك هو أفضل محلول استخلاص إذ أعطى أعلى فعالية نوعية للأنزيم و التي بلغت 14.3 وحدة / ملغم. بعد ذلك ركز المحتوى البروتيني للمستخلصات الأنزيمية الخام باستعمال كبريتات الأمونيوم بنسبة أشباع تراوحت بين 30-70 %، 20-90 %، 20-60 % لببسين الأغنام و الدجاج و سمك النويبي على التوالي، ثم أجريت عملية الديلزة باستعمال الماء المقطر، و قد أعطى ببسين الدجاج المنقى جزئيا أعلى فعالية أنزيمية. أظهرت دراسة ربط ببسين الدجاج المنقى جزئيا بأربعة أنواع من المواد الرابطة تضمنت السليكاجل، راتنج SRF، الجينات الكالسيوم و الاكار أن أفضل مادة ربط هي الأكار إذا أعطي أعلى كفاءة ربط و التي بلغت 67 %. كان أفضل تركيز لربط ببسين الدجاج المنقى جزئيا بالأكار هو 3 % إذ أعطى أعلى فعالية أنزيمية و التي بلغت 75 %. بلغت الفعالية المتبقية لببسين الدجاج المنقى جزئيا المرتبط بالأكار 21 % بعد استعماله 7 مرات، و بلغت الفعالية المتبقية لببسين الدجاج المنقى جزئيا المرتبط بالأكار 27.6 % عند خزنه لمدة 60 يوم بدرجة حرارة 4 م. وجد أن الرقم الهيدروجيني الأمثل للفعالية التحليلية لببسين الدجاج المنقى جزئيا الحر و المرتبط هو 2، و وجد أن الرقم الهيدروجيني الأمثل لثبات ببسين الدجاج المنقى جزئيا الحر و المرتبط كان 3 و أن كلا الأنزيمين الحر و المرتبط فقدا فعاليتهما عند الأرقام الهيدروجينية القاعدية 8 و 9. كانت درجة الحرارة المثلى للفعالية التحللية لببسين الدجاج المنقى جزئيا الحر 45 م و المرتبط 55 م، و وجد أن درجة الحرارة المثلى لثبات ببسين الدجاج المنقى جزئيا الحر و المرتبط كانت تتراوح بين 15-45 م و أن ببسين الدجاج المنقى جزئيا الحر و المرتبط فقد فعاليته بالكامل عند 85 م. استعمل ببسين الدجاج المنقى جزئيا المرتبط بالأكار في تحضير متحلل بروتيني من سمك النويبي و وجد أن التحلل البروتيني بلغ أقصاه في فترة 180 دقيقة و أن تحلل ببسين الدجاج المرتبط كان مقارب لتحلل ببسين الدجاج الحر حيث بلغ 2.6، 2.8 مل على التوالي.