Title of article :
استخلاص وتنقية انزيم الكولاجينيز من مخلفات امعاء بعض الاسماك
Author/Authors :
الموسوي, ام البشر حميد جابر جامعة البصرة - كلية الزراعة - قسم علوم الاغذية, العراق , عبد الرزاق, وسن كاظم جامعة البصرة - كلية الزراعة - قسم علوم الاغذية, العراق
Abstract :
استعملت مخلفات امعاء خمسة أنواع من الأسماك البحرية والنهرية شملت الكارب كبير الراس
Aristichthys nobilis والكارب # Hypophthalmichthys molitrix LF و الصبور Tenualosa ilisha والبياح Liza car inata والضلعة Scorberoides commersonianus باستعمال أربعة محاليل تضمنت الماء المقطر و محلول كلوريد الصوديوم بتراكيز 2 و 5 و 7 % ومحلول داري
Tris - HCL
بتركيز 0.05
مولاري وبدوال حامضية 7 و
7.5 و 8.5 ومحلول داري الفوسفات الصوديوم بتركيز
0.05 مولاري وبدوال حامضية 5 و
6.5
و 7 الغرض تحديد افضل نوع من الاسماك وافضل محلول استخلاص وقد وجد أن أسماك الكارب كبير الراس كانت افضل مقارنة بالاسماك الأخرى وان محلول داري فوسفات الصوديوم وبتركيز
0.05 مولاري وبدالة حامضية
6.5
هو أفضل محلول استخلاص اذ اعطى اعلى فعالية للانزيم والتي بلغت
220.45
وحدة / ملغم بروتين . اضيفت كبريتات الأمونيوم للمستخلص الانزيمي بنسبة تشبع 20 – 80 % كخطوة أولى من خطوات التنقية ، اذ بلغت الفعالية الانزيمية والنوعية 718.67 وحدة / مل و
659.33 وحدة / ملغم بروتين على التوالي وبحصيلة انزيمية بلغت
22.56
% وبعدد مرات تنقية مقدارها
4.44
مرة ، بعدها مرر المستخلص الانزيمي المركز على عمود كروموتوكرافيا التبادل الايوني 50-
DEAE - Sephadex A ، وأسفرت عملية التبادل الأيوني عن ظهور صورتين للانزيم W و C ، اذ بلغت الفعالية النوعية لكلا الصورتين
140.22
و 359.40 وحدة / ملغم بروتين وبحصيلة انزيمية
10.56
و 36.56
% وعدد مرات تنقية
1.57
و 4.75 مرة على التوالي ، خضعت الصورتان
M و C لخطوة تنقية اضافية تمثلت بخطوة الترشيح الهلامي باستعمال عمود الترشيح الهلامي 100-Sephadex G فبلغت الفعالية النوعية لكلا الصورتين
W و C 139.19
و 350.21 وحدة / ملغم بروتين وبحصيلة انزيمية
5.77
و 22.43 % وبعدد تنقية
4.26 و
19.68 مرة على التوالي ، بينت نتائج تحديد نقاوة صورتي الانزيم المذكورتين بظهور حزمة بروتينية واحدة لكل منهما عند استعمال الترحيل الكهربائي في هلام متعدد الاكريل امايد بغياب العوامل الماسخة .
Other languages abstract :
Five marine and freshwater fish species bighead carp Aristichthys nobilis, silver carp Hypophthalmichthys molitrix , shad Tenualosa ilisha, mullet Liza carinata and spotted leatherskin Scomberoides commersonianus, were used applying four solutions included distilled water, sodium chloride (at concentrations of 2, 5 and 7%), Tris-HCl buffer 0.05 M with pH 7, 7.5 and 8.5 sodium phosphate buffer 0.05 M , pH 5, 6.5 and 7 to limitation the best enzyme source and extraction solution.
It was found that bighead carp was the better source for obtaining enzyme in comparison with other sources and sodium phosphate buffer 0.05 M with pH 6.5 was the best extraction solution where it gave the highest enzyme activity of 220.45 U/ mg protein.
Ammonium sulphate added to enzyme extract with saturation rate 20-80% as a primary step for purification where the enzymatic and specific activities reached 718.67 U/ ml and 659.33 U/ mg protein, respectively, and an enzyme yield of 22.56% with 4.44 purification times.
Then, concentrated enzyme extract passed through ion exchange chromatographic column DEAE Sephadex A- 50.
Ion exchange process produced two enzymes W and C with specific activity of 140.22 and 359.40 U/ mg , enzyme yield 10.56 and 36.56% and purification times 1.57 and 4.75 , respectively.
The two enzymes subjected to and additional purification step of gel filtration using Sephadex G-100 gel filtration column where the specific activity for both enzymes W and C reached 139.19 and 350.21 U/ mg protein, enzyme yield of 5.77 and 22.43% and purification times 4.26 and 19.68, respectively.
Results for determination the enzyme purity for the two enzymes revealed the appearance of one protein band for each using Poly Acryl Amide gel electrophoresis without denaturizing agents
Keywords :
الأمعاء الدقيقة , الأنزيمات(الأحياء) , الأسماك , العراق
Journal title :
Basrah Journal Of Agricultural Sciences
Journal title :
Basrah Journal Of Agricultural Sciences
