الحاق ژني زير واحد B سم كلرا ( ctB )با زير واحد B انتروتوكسين شيگلا ديسانتري تيپ stxB)1 )، همسانه سازي و بيان آن در باكتري E. coli

زمينه و هدف يكي از مهم ترين فاكتورهاي بيماري زاي اصلي در شيگلا ديسانتري تيپ 1، انتروتوكسين شيگلا يا STxمي باشد، كه از يك زير واحد سمي آنزيماتيك به نام STxA و يك زير واحد پنتامريك متصل شونده به رسپتور به نام زير واحد B يا STxB تشكيل شده است. زير واحد STxB مسئول اتصال زير واحد سمي به گيرنده سطح سلولي Gb3 بوده و در نهايت باعث ورود سم به درون سلول و اثرات آن مي شود. زير واحد B سم كلرا (CTB) به عنوان ادجوانت مخاطي قوي براي واكسيناسيون شناخته شده و همجوشي ژنتيكي آن با هترو آنتي ژن هايي مثل stxB باعث تقويت ايمني همورال و مخاطي و پاسخ ايمني عليه آن آنتي ژن مي گردد. مواد و روش ها در اين مطالعه ژن هاي ctB و stxB پس از طراحي پرايمر به وسيله PCR تكثير و در وكتور pGEMهمسانه سازي شدند. ژن stxB به همراه لينكر غيرفوريني به روش برش آنزيمي با ژن ctB در وكتور pGEM الحاق شدند و در نهايت قطعه كايمريكctB-stxB در وكتور بياني pET28a(+) زير همسانه سازي گرديد. پروتئين كايمر تحت القاي IPTG بهينه سازي و به وسيله تكنيك SDS-PAGE و وسترن بلات مورد ارزيابي قرار گرفت. نتايج قطعه كايمريك ctB-stxBدر وكتور بياني pET28a(+) به وسيله توالي يابي، PCR و آناليز آنزيمي تاييد گرديد. همچنين پروتئين توليدي به وسيله SDS-PAGE و وسترن بلات مورد تاييد قرار گرفت. نتيجه گيري پروتئين نوتركيب توليدي بعد از بررسي ايمني زايي مي تواند به عنوان كانديدي براي واكسن مخاطي موثر و نوين عليه باكتري شيگلا ديسانتري تيپ 1 در نظر گرفته شود.