Title of article :
تشخيص پيش از تولد گروه خوني جنين انسان با استفاده از RhD با روشheminested-PCR
Author/Authors :
فاطمه ،آهنگري پژوهشگاه ملي مهندسي ژنتيك و زيست فناوري تهران , محمد ،محمدپور دانشگاه شهيد بهشتي , مريم ، شمس لاهيجاني دانشگاه شهيد بهشتي , بهاره ،رباني دانشگاه خاتم , فاطمه ،محسني دانشگاه علوم پزشكي ايران
Abstract :
هدف: آنتي ژن گروه خوني رزوس كه در ايجاد بيماري همولتيك نوزادان، واكنش هاي انتقال خون و كم خوني همولتيك خود ايمن دخيل است، در انتقال خون و طب باليني اهميت زيادي دارد. علي رغم مصرف وسيع ايمونوگلوبولين Rh در مادران Rh منفي ايمونيزاسيون ناشي از Rh منفي اتفاق مي‌افتد. آنتي ژن RhD با استفاده از روش PCR در ابتداي دوران جنيني قابل شناسايي بوده و افراد Rh منفي فاقد ژن RhD مي‌باشند. روش مطالعه: پنج ميلي ليتر خون افراد نرمال از 38 فرد Rh مثبت و Rh منفي به عنوان كنترل و 40 نمونه پرزهاي كوريوني (CVS) از زنان باردار در هفته هاي 8 تا 12 بارداري تهيه شد. استخراج DNA از CVS انجام گرديد. سپس واكنش زنجيره‌اي پلي مراز نيمه آشيانه‌اي (heminested-PCR) با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي انجام شد. محصولات PCR بر روي ژل آگارز آناليز شدند. ژن Rh در تمام نمونه هاي CVS مورد شناسايي قرار گرفت.نتايج: با استفاده از روش heminested-PCR افراد دهنده خون كه از نظر سرولوژي RhD مثبت بودند ژن RhD مورد شناسايي قرار گرفت. سي وپنج نمونه داراي ژن RhD مثبت و 5 نمونه فاقد ژن RhD و يا RhD منفي بود. آزمايشات PCR و الكتروفورز در خصوص نمونه هاي CVS نمايانگر اين بود كه همانند نمونه هاي خوني در مرحله اول تكثير ژني چنانچه RhD مثبت باشد دو باند مشاهده شده و در صورت عدم حضور ژن RhD نمونه تكثير شده بصورت تك باند مشاهده مي‌شود. نتيجه گيري: Rh نمونه هاي جنين با استفاده از روش heminested-PC با اطمينان و سرعت زياد، تعيين مي‌شود كه نتايج آزمايش هاي سرولوژيكي و مطالعات مولكولي، تعيين Rh نمونه هاي جنين با هم مطابقت دارد.
Other languages abstract :
Background: The rhesus blood group antigen system is important in transfusion and clinical medicine، being involved in hemolytic disease of the newborn، transfusion reactions and autoimmune hemolytic anemia. Despite the widespread use of rhesus immunoglobulin prophylaxis in rhesus D (RhD)-negative mothers، rhesus immunization still occurs. Knowledge of the RhD status of the fetus is important in the clinical management، because no further diagnosis or therapeutic procedures are necessary if the fetus is RhD-negative. RhD antigen can be detected using a sensitive PCR-based assay. It was shown that RhD negative individuals lack the RhD gene. Methods: We obtained 5ml blood samples from thirty eight RhD positive and negative blood donors، as controls and forty chorionic villus samples (CVS) from pregnant women at 8 to 12 weeks of gestation. DNA was extracted from CVS by standard salting out and blood DNA was extracted by boiling procedure. DNA amplification (heminested-PCR) was carried out with appropriate primers. Results: PCR products were analyzed on an agarose gel. RhD gene determined in all CV samples.
Keywords :
آمنيوسنتز , بيماري هموليتيك نوزادان , واكنش زنجيره اي پليمراز نيمه آشيانه اي , نمونه پرزهاي كوريوني , ژن RhD(Q4)
Journal title :
Iranian Journal of Pediatrics
Journal title :
Iranian Journal of Pediatrics
