Isolation and identification of Campylobacter jejuni from poultry carcasses using conventional culture methods and multiplex PCR assay

باكتري كمپيلوباكتر ججوناي يكي از عوامل اصلي گاستروآنتريت ناشي از مصرف مواد غذايي آلوده مي باشد. طيور و محصولات آن نقش مهمي را درانتقال بيماري كمپيلو باكتريوزيس به انسان دارا مي باشند. در اين مطالعه جهت مقايسه دو روش كشت مرسوم و مولتي پلكس PCR در شناسايي باكتري كمپيلو باكتر ججوناي كه از لاشه طيور پس از مرحله تخليه امعا و احشا در كشتارگاه صنعتي مشهد جداسازي گرديده بود، يكصد لاشه طيور از 20 گله گوشتي با استفاده از روش rinse test مورد نمونه برداري قرار گرفت. نمونه ها ابتدا در محيط براث غني سازي گرديد و سپس در محيط آگار انتخابي كشت داده شد. كلني هاي مشكوك در آگار خوندار گوسفندي جداسازي گرديد و از نظر شكل باكتري، حركت، تستهاي بيوشيميايي و رنگ آميزي گرم و نيز تست هيدروليز هيپورات مورد آزمايش قرار گرفت. جهت مقايسه تست مولتي پلكس PCR از كلني هاي مشكوك با استفاده از دو جفت پرايمر جهت تشخيص جنس كمپيلو باكتر و گونه ججوناي انجام گرديد. در اين مطالعه با استفاده از روش كشت مرسوم ميزان آلودگي لاشه هاي طيور 76% و در استفاده از روش مولتي پلكس PCR 28% تعيين گرديد. ميزان 2% از نمونه ها كه در آزمايش كشت مرسوم از نظر تست هيدروليز هيپورات منفي بودند، در تست مولتي پلكس PCR مثبت تشخيص داده شد. به نظر مي رسد نتايج روش كشت مرسوم كه شناسايي باكتري كمپيلو باكتر ججوناي بر اساس تست هيدروليز هيپورات صورت مي گيرد قابل اطمينان نمي باشد و استفاده از روش مولتي پلكسPCR كه قطعه ژن اختصاصي را از گونه باكتري كمپيلو باكتر ججوناي تكثير مي نمايد توصيه مي گردد.

Campylobacter jejuni is a major cause of food-borne diarrhea in many countries. Poultry and poultry products are known as important sources of human campylobacteriosis. In this study, conventional culture and multiplex PCR methods were compared for the detection of C. jejuni isolated from poultry carcasses. A total of 100 samples, representing 20 broiler flocks, were collected from poultry carcasses after the evisceration stage in the processing line at a commercial broiler slaughtering facility in Mashhad, Iran. In the conventional culture method, samples were processed by enrichment followed by selective plating, and then suspected colonies were isolated on sheep blood agar and tested for morphology, motility, Gram staining, biochemical properties and hippurate hydrolysis activity. For the identification of the Campylobacter genus and its jejuni serovar by molecular methods, a multiplex PCR assay (m-PCR) with two sets of specific primers was used. In the hippurate hydrolysis test of suspected colonies, 76% of the samples were determined as positive, while in the m-PCR assay 28% of cultures harvested were identified as C. jejuni. Two percent of hippurate hydrolyze negative colonies were found positive in the m-PCR test.