Detection of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis in Cow Milk Using Culture and PCR methods

مايكوباكتريوم آويوم زير گونه پاراتوبركلوزيس(MAP) عامل سببي بيماري يون يا Paratuberculosis از جمله بيماري‌هاي عفوني مزمن مهم از نظر اقتصادي است كه گريبانگير صنعت گاوداري و نشخواركنندگان مي‌باشد. اين بيماري به صورت آنتروكوليت گرانولوماتوز، لنفادنيت و تورم عروق لنفاوي موضعي ظاهر مي‌شود كه علامت شاخص اين بيماري كاهش وزن پيشرونده بيمار است. با توجه به اهميت تشخيص اين بيماري در اين بررسي از دو روش كشت و واكنش زنجيره‌اي پليمراز براي شناسايي اين ميكروارگانيسم استفاده شد. در اين بررسي 100 نمونه شير از گاوهاي به ظاهر سالم و 100 نمونه شير از گاوهاي مشكوك به ابتلاي به بيماري يون مربوط به تعدادي از گاوداري هاي منطقه شهرستان سراب، آذربايجان شرقي، ايران انجام گرفت. پس از جمع آوري نمونه ها? آزمايش مستقيم ميكروسكوپي با رنگ‌آميزي اختصاصي ذيل نلسون صورت گرفت. سپس كشت باكتريايي روي محيط اختصاصي تهيه شده و در نهايت با روش واكنش زنجيره‌اي پليمراز با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي شناسايي مايكوباكتريوم اويوم پاراتوبركلوزيس بررسي شد. براساس نتايج آزمايش مستقيم، كشت و واكنش زنجيره‌اي پليمراز بر روي شير100 راس گاو به ظاهر سالم، به ترتيب 8، 9 و 12 مورد مثبت و در بررسي اين تست ها بر روي شير 100 راس گاو مشكوك به ابتلاي به بيماري يون به ترتيب 15، 40 و44 مورد مثبت شناسايي شد. نتايج حاصل از اين بررسي نشان داد آزمايش كشت و واكنش زنجيره‌اي پليمراز در شناسايي عامل بيماري يون بسيار حايز اهميت هستند. لذا با توجه به فراواني اين بيماري در منطقه مورد مطالعه مي توان از هركدام از روش هاي ياد شده در شناسايي اين ميكروارگانيسم استفاده كرد.

Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis (MAP) is the cause of John’s disease also called paratuberculosis. This is economically one of the important infectious diseases in cattle and ruminant husbandry. This disease is manifested as granulomatosis entrocolitis, lymphadenitis and inflammation local lymphatic vessels. The typical sign of this disease is progressive loss of weight. Considering the importance of detection of this disease in this study, two methods, culture and PCR, were used for the identification of this microorganism. In this study 100 milk samples from apparently healthy cows and 100 milk samples from cows that have been suspicious of John’s disease were taken from in Sarab, East Azarbaijan, Iran. Direct microscope observation after ziehl-neelsen staining was done. Then, bacterial culture on specific medium was carried out, and finally, identification of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis was examined using PCR and specific primers. Using direct observation, culture and PCR analyses showed that from 100 healthy cow milk samples, 8, 9 and 12 samples were positive MAP for each method respectively. The results of direct observation, culture and PCR analysis on affected cows were 15, 40 and 44, respectively. The results of this study showed that culture and PCR analyses methods are important in the identification of the causes of this disease. Therefore, considering the frequency of the disease in the studied region, either of those methods can be used in the microorganism identification.