Author/Authors :
افشار، مستانه نويسنده Islamic Azad University, Karaj branch, Karaj. Iran Afshar, .M , اسماعيلي، فرهاد نويسنده Hib Laboratory, Razi Vaccine & Serum Research Institute, Karaj, Iran Esmaily, .F , امينيان، مهدي نويسنده Department of Biochemistry, Tehran University of Medical Science, Tehran, Iran Aminian, .M , اصلي، اسماعيل نويسنده Hib Laboratory, Razi Vaccine & Serum Research Institute, Karaj, Iran Asli, .E , هادي، عاطفه نويسنده Department of Human Bacterial vaccine, Razi vaccine and serum research institute, Karaj, Iran Hadi, .A , ترابي، مژگان نويسنده , , حاتمي، عليرضا نويسنده Hib Laboratory, Razi Vaccine & Serum Research Institute, Karaj, Iran Hatami, .A
Abstract :
در اين مطالعه، بمنظور تعيين ميزان رشد هفت ايزوله از هموفيلوس آنفلوانزا تايپ (BHIB)، از چهار محيط كشت مختلف استفاده شد تا بهترين محيط از نظر بالاترين بازده رشد باكتريايي انتخاب گردد. براي اين كار چهار محيط براث بكار برده شدند كه شامل انفوزيون مغز-قلب (BHIB)، تريپتيكاز سوي (TSB)، مولز هينتون (MHB) و گونوكوكسي (GCB) كه به همه آتها دو فاكتور رشد هموگلوبين و ايزوويتالكس، هر كدام بميزان 1? اضافه شده بود. ميزان رشد هر ايزوله در هر يك از محيطها توسط اندازه‌گيري CFU/ml انجام پذيرفت. چهار ايزوله از هفت ايزوله مورد مطالعه بالاترين رشد را در BHIB و ديگر سوشها اين ميزان را در TSB از خود نشان دادند كه به مقدار بيش از CFU/ml 1010 طي 18 ساعت رسيد. در مرحله بعد، با هدف انتخاب بهترين ايزوله با بالاترين ميزان آنتي ژن پلي ساكاريد كپسولي (CPS-b)، مقدار اين آنتي ژن در هر ايزوله، كه از تركيبي بنام پلي ريبوفسفات (PRP) ساخته شده، به دو روش مختلف اندازه‌گيري شد: الايزاي ساندويچ غير مستقيم و بيال. لازم به ذكر است كه آنتي باديهاي استفاده شده در اين نوع الايزا توسط تزريق واكسن Hib به خرگوش و رت تهيه شد. بالاترين ميزان PRP كپسولي متعلق به يكي ازسوش‌ها با نام‌گذاري (Hib5s) بود كه به ميزان mg/lit 321 از اين آنتي ژن مهم را توليد كرده بود كه متعاقبا مي‌توان از اين سوش در واكسن سازي بهره جست.
Abstract :
In the present study, seven isolates of Haemophilus influenzae type b were cultured in four different media to compare growth rate and capsule production. Four liquid media namely brain heart infusion broth (BHI), trypticase soy broth (TSB), Mueller Hinton Broth (MHB) and Gonococci broth (GC) with added supplements (1% hemoglobin, 1% Isovitalex) were used. The growth was measured by colony counting (CFU/ml) using serial dilution. Four of the isolates showed the highest growth rate with the average of 1013 CFU/ml on BHI broth while TSB had the second highest growth of more than 1010 CFU/ml in an 18-hour culture at 37 ?C culture. In the next step, the amount of capsular polysaccharide (CPS-b) antigen which is made of Polyribosyl ribitol phosphate (PRP) was assessed all isolates by two methods: modified Indirect Sandwich Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and Bial method to select the isolate producing the highest amount of PRP. The antisera used in sandwich ELISA were prepared by immunization of Rabbit and Rat. The maximal amount of PRP was produced by isolate Hib (5s) with the amount of 321 mg/lit.
