Author/Authors :
Rashno، Mohammad نويسنده School of Veterinary Medicine, Shahid Chamran University, P.O. Box 61355-145, Ahvaz, I.R. Iran , , Seyfi Abad Shapouri، Masoud Reza نويسنده Department of Pathobiology, School of Veterinary Medicine, Shahid Chamran University, P.O. Box 61355-145, Ahvaz, I.R. Iran , , Jolodar، Abbas نويسنده Department of Basic Sciences, School of Veterinary Medicine, Shahid Chamran University, P.O. Box 61355-145, Ahvaz, I.R. Iran ,
Abstract :
براي تعيين طول قطعات DNA در ژل آگارز يا پلي اكريلاميد بطور گسترده از ماركرهاي DNA استفاده مي گردد. ماركرهاي DNA را مي توان با مخلوط كردن چندين محصول PCR با طول هاي مشخص تهيه نمود. شيوه ديگر براي تهيه اين مواد، هضم DNA ژنومي باكتريوفاژها يا پلاسميدهاي طبيعي و مصنوعي بوسيله آنزيم هاي محدودگر مي باشد. مطالعه حاضر چگونگي ساخت يك پلاسميد مصنوعي را شرح مي دهد كه پس از هضم با تنها يك آنزيم محدودگر، موجب توليد ماركر DNA 100bp ، يكي از رايجترين انواع ماركرهاي DNA مي شود. راهكار ما در اين مطالعه شامل همسانه سازي پي در پي 10 محصول PCR با طول هاي 100 تا 1000bp در پلاسميد pTZ57R، در مكان هاي آنزيم هاي محدودگر BamHI و Bgl II، و آزاد سازي اين قطعات از پلاسميد نوتركيب با استفاده از آنزيم EcoRV بود. از اين راهكار مي توان براي ساخت انواع پلاسميدهاي مصنوعي بمنظور توليد انواع مختلف ماركرهاي DNA استفاده نمود
Abstract :
DNA size markers are widely used to estimate the size of DNA samples on agarose or polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). DNA markers can be prepared by mixing PCR products with definite sizes. Alternatively, they are prepared by restriction enzyme digestion of the genomic DNA of bacteriophages or natural and synthetic DNA plasmids. The present study describes engineering of a synthetic plasmid which produces a 100 bp DNA ladder, a popular DNA size marker, upon digestion with a single restriction enzyme. Our strategy consisted on sequential cloning of ten PCR products of 100 to 1000 bp in plasmid pTZ57R, using the BamHI and BglII restriction enzymes and releasing the fragments from the recombinant plasmid by enzyme EcoRV. This strategy could be applied to construct various complex synthetic vectors to produce different DNA ladders.
