The mRNA expression study on small amount of Theileria annulata lymph node biopsy sample using SMART-cDNA technology

زمينه مطالعه: يكي از مشكلات در تحقيقات مرتبط با بيان ژني كه با روش‌هاي RT-PCR و يا Northern blot آناليز مي‌گردند، مقادير كم مواد بيولوژيك مي‌باشد. هدف: در مطالعه حاضر از روش سنتز SMART-cDNA و تكنيك SMART-cDNA-PCR براي بررسي بيان سه ژن مرحله ماكرو شيزونتي انگل تيلريا آنولاتا در مقدار كم نمونه اخذ شده از عقده لنفاوي استفاده شد. روش كار: سه ژن مورد بررسي در اين مطالعه بيان كننده سه پروتيين TaSp, TaD و ‌70HSP بودند. با روش RT-SMART-PCR، cDNA هاي كامل از mRNA هاي پردازش شده با موفقيت تكثير شدند. نتايج: نتايج نشان داد كه روش SMART-cDNA مي‌تواند الگوهاي mRNA را بصورت cDNA بطور كامل رونوشت برداري كند. SMART-cDNA مشتق شده از ژن TaSp در وكتور R/T57pTZ كلون و تعيين توالي شد. توالي نوكليوتيدي قطعه DNA كلون شده نشان داد كه اين توالي با توالي نوكليوتيدي كد كننده پروتيين TaSp همخواني دارد. نتيجه گيري نهايي: نتايج نشان داد كه تكنيك SMART-PCR روشي كاربردي جهت تكثير توالي كامل mRNAs بصورت cDNAs مي‌باشد و مي‌تواند براي تحقيقات بيان ژن از مقادير كم مواد بيولوژيك بخوبي مورد استفاده قرار گيرد.

Background: A major issue in many gene expression studies utilizing small amount of biological materials is the limited quantity of RNA purified from clinical samples, which is often used for RT-PCR or standard Northern blot analysis. OBJECTIVES: The SMART cDNA synthesis method and sub-sequent SMART-cDNA-PCR technique was used to analyse 3 genes in macroschizonts of Theileria annulata in small lymph node biopsy material. METHODS: The SMART-cDNA of TaSp gene was cloned in pTZ57R/T-vector and sequenced. We focus-ed on genes encoding surface proteins TaSp, TaD and HSP70. RESULTS: Our results showed that SMART cDNA dependably reproduces the expression profile found in messenger RNA. The RT-SMART-PCR showed the amplification of the processed mRNAs. The sequencing analysis showed that the amplified cDNA was coded for TaSp protein in Theileria annulata. CONCLUSIONS: It was concluded that the SMART PCR technique is practical for amplification of complete sequence of mRNAs in the form of cDNAs, and therefore for gene expression studies if only small amounts of starting material are available.