Detection of avian reoviruses causing tenosynovitis in breeder flocks in Iran by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) and restriction enzyme fragment length polymorphism (RFLP)

‌چكيده زمينـه مـطالعه: ‌ريوويروس پرندگان از مهمترين عوامل بيماري‌هاي پرندگان به‌ويژه آرتريت ريوويروسي، تنوسينوويت، بيماري مزمن تنفسي، و سندرم سو جذب مي‌باشند. رخداد تنوسينوويت در مرغان مادر از ساير رده هاي طيور پرورشي بيشتر مي‌باشد. هدف: هدف از اين بررسي شناسايي ريوويروس هاي ايجادگر تنوسينوويت در پرندگان از گله هاي مرغ مادر ايران به روش ‌ RT-PCR و RFLP بود. روش كار:‌ ‌در اين مطالعه از گله هاي مرغ مادر با سن بالاي 45 هفته، 800 نمونه مدفوعي با سواپ اخذ گرديد و در محيط ‌ PBS به آزمايشگاه منتقل گرديد و در نهايت بعد از مخلوط كردن نمونه ها از يك مزرعه، 120 نمونه جهت بررسي حضور ريوويروس ها مورد استفاده قرار گرفت. در اين مطالعه براي تشخيص ريوويروس هاي ايجادگر تنوسينوويت از پرايمرهايي اختصاصي براي نواحي ژنومي 1Sبا باند هدف pb 1023 و ‌4S با باند هدف ‌ bp437 استفاده شد. ‌نتايج:‌ ‌بعد از انجام آزمايش PCR، 5 نمونه با استفاده از پرايمرهاي ناحيه ژنومي ‌1S و 6 نمونه با استفاده از پرايمرهاي نـاحيـه ژنومي 4S مثبت شدند كه موارد مثبت با 5 آنزيم هضم كننده مورد هضم آنزيمي قرار گرفتند. آناليز قطعات حاصله از هضم آنزيمي محصـولات PCR در تمـامي نمونه هاي مثبت دلالت بر همسان بودن الگوي هضم آنزيمي نمونه‌ها با الگوي هضم هر دو سويه واكسن و استاندارد ‌1133S داشت. نتيجه گيري نهايي: در اين بررسي مشخص شد كه بكارگيري روش مولكولي RT-PCR/RFLP روش مناسبي جهـت شنـاسـايـي ريـوويـروس‌هـا مـوجـود در مـزرعـه و متمـايـز كردن آنها از همديگر مي‌باشد. اين مطالعه اولين مطالعه مولكولي بر روي ريوويروس‌هاي ايجادگر تنوسينوويت در ايران مي باشد كه بر مبناي شناسايي 2 ناحيه ژنومي 1S و ‌4S و نيز بكار گيري 5 آنزيم هضم كننده در گله هاي مرغ مادر در ايران صورت گرفت.

Abstract: BACKGROUND: Avian reoviruses (ARVs) are members of the Orthoreovirus genus; one of the 12 genera of the Reoviridae family. The ARVs are the cause of some important diseases in poultry such as reovirus-induced arthritis, tenosynovitis, chronic respiratory disease, and mal-absorption syndrome. OBJECTIVES: In this study, the presence of ARVs in the Iranian breeder flocks was investigated through reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) and restriction enzyme fragment length polymorphism (RFLP). METHODS: A total of 800 fecal swab samples were initially collected from breeder flocks (older than 45 weeks of age). They were then sent to the laboratory in containers with PBS, and after that they were pooled and finally to 120 samples were obtained. The total RNA extracted from the pooled fecal samples were used to amplify the selected parts of the S1 (1023 bp) and S4 (437 bp) genes from the ARV field isolates using RT-PCR. The positive RT-PCR amplified products were further analyzed by RFLP using five restriction enzymes. RESULTS: Based on the findings, 5 samples were positive with the S1 primer and 6 samples were with the S4 one. The patterns observed after the digestion of PCR products revealed that the isolates of this study were identical to both the S1133 vaccine and standard strains. CONCLUSIONS: The findings suggested that the RT-PCR/RFLP analysis might be considered as a simple and rapid approach for the differentiation of ARV isolates. This study was the first molecular detection of the ARVs presence in the Iranian breeder flocks using the RT-PCR amplification of the S1 and S4 genes and RFLP analysis.