عنوان :
بررسي امكان تهيه واكسن غير فعال جهت پيشگيري بيماري ويروسي لكه سفيد با استفاده از روشهاي هسته‌اي و غيرهسته‌اي در ميگو سفيد هندي
شرح پديد آور/مجري (مجريان) طرح :
افشار نسب، محمد
شناسه هاي افزوده :
مرتضائي، رضا ، همكارطرح , دشتيان نسب، عقيل ، همكارطرح , جرفي، الهام ، همكارطرح , يگانه ، وحيد ، همكارطرح , گنجور، محمدسعيد ، همكارطرح , محمدي، اله كرم ، همكارطرح , عابديان، آرمين ، همكارطرح , قره ي، بهروز ، همكارطرح , پذير، خليل ، همكارطرح , غريبي، قاسم ، همكارطرح
تنالگان :
وزارت ﺟﻬﺎد ﮐﺸﺎورزي - ﺳﺎزﻣﺎن ﺗﺤﻘﯿﻘﺎت، آﻣﻮزش و ﺗﺮوﯾﺞﮐﺸﺎورزي - ﻣﻮﺳﺴﻪ ﺗﺤﻘﯿﻘﺎت ﻋﻠﻮم ﺷﯿﻼﺗﯽ ﮐﺸﻮر
چكيده فارسي :
به منظور بررسي غير فعال سازي ويروس بيماري لكه سفيد با استفاده از پرتوهاي يونساز گاماو بيم الكترون و همچنين ماده شيميائي فرمالين با حفظ خاصيت آنتي ژنتيكي ويروس، ابتدا اقدام به تهيه منبع ويروس و خالص سازي آن گرديد. سپس نسبت به تهيه 1000 عدد ميگوي 7تا 12 گرمي از مركز پرورش ميگوي پژهشكده ميگوي كشور واقع در حله نموده و آنها را به آزمايشگاه منتقل و آداپته نموديم. سپس نسبت به غير فعال سازي باكتري ويبريو پاراهموليتكوس با استفاده از فرمالين و پرتوهاي يونساز گاما و الكترون اقدام و به ميگوهاي مورد آزمايش تزريق تا موجب تحريك سيستم ايمني ميگوها گردد. منبع ويروس تهيه شده را با شناسائي ويروس بيماري لكه سفيد از همه گيري كه در سال 1386 در استان بوشهر اتفاق افتاده بود و با استفاده از روشهاي مولكولي و آسيب شناسي و ميكروسكوپ الكتروني اقدام و با تزريق به خرچنگ دراز آب شيرين نسبت به تهيه منبع ويروس اقدام گرديد. سپس ويروس تهيه شده را ليوفليزه نموده و تعيين تيتر نموديم و تيتر ويروس را در دو حالت پرتوتابي شده و پرتوتابي نشده محاسبه گرديد. ويروسهاي پرتوتابي شده را تعيين د.ز نموده و سپس آنها را با استفاده از پرتوهاي گاما، الكترون و فرمالين و با تعيين دوز مطلوب غير فعال نموديم. سيستم ايمني ميگوها را با استفاده از تزريق باكتري غير فعال شده ويبريو پاراهموليتيكوس كه قبلا ليوفليزه شده تحريك نموده و سپس ميگوها را به 60 گروه پانزده تائي تقسيم نموديم. منابع ويروسي پرتوتابي شده را كه به عنوان واكسن ميباشند به صورتهاي مختلف حمام و تزريقي در ميگوها موردآزمايش قرار داده و اطلاعات لازم ثبت گرديد. نتايج نشان داد ويروس بيماري سندرم لكه سفيد ميگو با تيتر 10 5.4 LD50/ml توسط پرتوگاما با دز 15 كيلوگري در حالت انجماد كاملاً غيرفعال سازي مي گردد. همچنين ويروس بيماري سندرم لكه سفيد ميگو با تيتر 10 5.4 LD50/ml توسط بيم الكترون با دز 13.5 كيلوگري در حالت انجماد كاملاً غيرفعال سازي مي گردد. و با فرمالين ويروس بيماري سندرم لكه سفيد ميگو با تيتر 10 5.4 LD50/ml توسط فرمالين 0.5% v/v به مدت 10 دقيقه در دماي اتاق كاملاً غيرفعال سازي مي گردد. باكتري ويبريو پاراهموليتيكوس در حالت ليوفيليزه با دز 8 كيلوگري پرتو گاما غيرفعال سازي مي شود. و با توجه نتايج دز حفاظتي 50% ( PD50%) بدست آمده در مورد راديو واكسن غيرفعال شده با پرتو گاما ، الكترون و فرمالين مي توان نتيجه گرفت كه هر سه نوع واكسن در زمان حداكثر 2 هفته پس از واكسيناسيون در مقابل ويروس فعال با تيتر 102.4 LD50 / 50 μl اثر حفاظتي خوبي دارند. ولي با توجه نتايج دز حفاظتي 50% ( PD50%) بدست آمده در مورد راديو واكسن غيرفعال شده با پرتو گاما و الكترون اثر حفاظتي اين راديو واكسن وقتي به غذاي گروههاي ميگو ماده ايميونوژن اضافه گردد و همچنين وقتي از باكتري ويبريو غيرفعال شده به عنوان يك محرك ايمني همزمان با تزريق راديو واكسن استفاده شده، بيشتر از وقتي است كه راديوواكسن بدون ايميونوژن و بدون باكتري غيرفعال مورد استفاده قرار گيرد (در زمان حداكثر 2 هفته پس از واكسيناسيون). همچنين با توجه نتايج دز حفاظتي 50% ( PD50%) بدست آمده در مورد راديو واكسن غيرفعال شده با پرتو گاما و الكترون، مي توان گفت كه هر دو واكسن اثر حفاظتي خوبي از خود نشان داده اند ولي در مورد راديوواكسن غيرفعال شده با پرتو گاما اين اثر حفاظتي بيشتر از راديوواكسن الكترون مي باشد (در زمان حداكثر 2 هفته پس از واكسيناسيون). با توجه به نتايج دز حفاظتي 50% ( PD50%) بدست آمده در مورد واكسن غيرفعال شده با فرمالين، اثر حفاظتي اين واكسن وقتي به غذاي گروههاي ميگو ماده ايميونوژن اضافه گردد و واكسن بدون ايميونوژن تقريباً مشابه است (در زمان حداكثر 2 هفته پس از واكسيناسيون). به طور كلي راديوواكسن غيرفعال شده با گاما اثر حفاظتي بهتري از راديوواكسن غيرفعال شده با الكترون و واكسن غيرفعال با فرمالين نشان داده است. ولي با اين وجود راديوواكسن الكترون و واكسن فرمالينه نيز اثر حفاظتي خوبي در زمان حداكثر 2 هفته پس از واكسيناسيون نشان داده اند.
چكيده انگليسي :
Abstract:
The inactivated of white spot syndrome virus (WSSV) by Gama and Electron radiation and chemical material such as Formalin with antigen property have been done during last year. At the first time the stock of virus prepared and purred it. Six hundred of shrimp Fenneropenaus indicus with average weight 7 to 12 gram collected from shrimp research station in Heleh area and transported to Shrimp Research Institute in Boushehr province. Vibrio parahemolyticus obtained from Veterinary University of Tehran and then lyophilized it. The bacterial V. parahemolyticus inactivated with Gamma, electron and formalin and then injected to shrimp for activated the immune system. The source of viruses was identified through PCR, TEM and histopathology methods from the shrimp infected in 2009 occurrence of boushehr province. The virus injected to crayfish and collected the hemlymph for prepared the stock of WSSV virus. The virus was lyophilized and then exposed to gamma and electron radiation and formalin with optimal dose for inactivated the virus. The shrimp divided to 25 groups and each group consist of six shrimp and the vaccine exposed to shrimp with injected and bathroom methods and the documented the result after 15 days. In vivo virus titration was performed in Penaeus indicus. Inactivation of WSSV was carried out by a gamma cell instrument Nordian, model 220 with dose rate: 4.8 Gy/sec and activity: 20469 Ci. The LD50 of live virus stock was calculated 10 5.4 / ml and the optimum dose of gamma radiation beam to inactivate WSSV was obtained 14-15 kGy. The LD50 of live virus stock was calculated 10 5.4 / ml and the optimum dose of electron beam to inactivate WSSV was obtained 12-13 kGy and and the virus inactivated by formalin 0.5% V/V during 10 minutes.The LD50 of live virus stock was calculated by Karber method 10 3.29 /ml and 10 5.35 /ml, respectively. The V. parahemolyticus was inactivated with 8 KG. The result showed all vaccine during 2 hours have a good effect to shrimp viruses with the102.4 LD50 / 50 μl titre. The result showed if the Gamma and electron vaccine increase to feed of shrimp the effect of vaccine is better than when used without feed. The end of experiment our study showed that the Gamma vaccine has the better effect to control WSSV during 2 hours with comparing the others.
كليدواژه :
ميگو سفيد هندي , فرمالين , پرتو الكترون , پرتو گاما , پرتو گاما , ويروس بيماري لكه سفيد , واكسن
اطلاعات نشر :
تهران ﻣﻮﺳﺴﻪ ﺗﺤﻘﯿﻘﺎت ﻋﻠﻮم ﺷﯿﻼﺗﯽ ﮐﺸﻮر
مشخصات ظاهري :
مصور (رنگي)، جدول، نمودار
فروست :
موسسه تحقيقات علوم شيلاتي كشور 90/312
