الحاقو همسانه سازي ژن آلفا- آميلاز باكتري باسيلوس سابتيليس DR8806 در وكتور بياني (+)pET28a

Insertion and cloning ofBacillus subtilis DR8806 a- amyalsegene in pET28a(+) expression vector

پرایمینگ بذر یكی از تكنیكهای رایج آبگیری برای افزایش كارآیی بذر می باشد. در این آزمایش، یافتن مناسب ترین شرایط شامل نمك های مختلف، مدت زمان و غلظت های محلول پرایمینگ برای بذر همیشه بهار (Calendula officinalis) مورد بررسی قرار گرفت. این پژوهش به صورت فاكتوریل در قالب طرح كاملاً تصادفی با 3 تكرار در آزمایشگاه انجام شد. فاكتور اول نمك (در سه سطح شامل knO3,NaCl و ZnSO4) ، فاكتور دوم غلظت ( 0، 50 100، 150 و 200 میلی مولار) و فاكتور سوم شامل زمان (3 7 و 10 ساعت) بود. در این آزمایش كلیه نمك های مورد بررسی بر روی پارامتر های مورد نظر اثر گذاشت. بدین صورت كه نمك NaCl بیشترین اثر را در غلظت های 100، 200 50 و 150 میلی مولار به ترتیب روی طول ریشه چه، طول ساقه چه، وزن خشك ریشه چه و درصد جوانه زنی گیاه همیشه بهار داشت. همچنین نمك ZnSO4 كمترین اثر را در غلظت های 100، 200 200 و 200 میلی مولار به ترتیب روی طول ریشه چه، طول ساقه چه، وزن خشك ریشه چه و درصد جوانه زنی داشت. ن knO3 هم كمترین اثر را با غلظت 150 مولار روی وزن خشك ساقه چه داشت. نمك های NaCl و KNO3| هر دو بیشترین اثر اسموپرایمیمگ را روی درصد جوانه زنی (85.77٪ و 85.93٪) داشتند ولی با افزایش غلظت آنها از مقدار آن كاسته شد و آب مقطر بیشترین تاثیر را بر روی این فاكتور داشت.

In the present study, -amyalse gene from bacillus subtilis DR8806 which was previously cloned in pTZ57R/T vector was doubly digested with BamHI and HindIII endonucleases which have restriction sites at two ends of gene. pET28a(+) vector was also digested with the same enzymes. Amy gene was inserted into pET28a(+) expression vector with the same sticky ends.Expression vector containing the target gene was transformed to E. coliBL21(DE3) as an expression host. The insertion of target gene into expression vector was confirmed by colony PCR using amylase specific primer pair and restriction enzyme digestion using the mentioned endonucleases