جداسازي و تشخيص سويه هاي اشريشيا كلي وروتوكسيژنيك از شير خام با استفاده از روش هاي روتين آزمايشگاهي ، سرولوژي و آنتي بيوگرام در شهر ايلام

بعضی سویه های اشریشیا كلی، سیتوتوكسینی تولید میكنند كه در ابتدا به وسیله KOnOWal Chuk و همكارانش توصیف شد. این توكسین برای سلولهای VCTO سیتوپاتیك بوده و بعدها به عنوان وروتوكسین مطرح گردید. اشریشیا كلی های تولید كننده ی ورووكسین (VTEC) به سروتایپهای مختلف O تعلق داشته و با سندروم اورمی همولیتیك (HUS) و كولیت های هموراژیك (FIC) ارتباط دارند. در ایلام اطلاعات بسیار اندكی در ارتباط با میزان و شیوع آلودگی با VTEC وجود دارد. مطالعه حاضر در جهت كسب اطلاعات درباره شیوع VTEC در آن صورت گرفته است. در این پژوهشی كه از اردیبهشت ماه سال ۱۳۹۰ تا ردیبهشت ۱۳۹۱ انجام شد، میزان آلودگی شیرهای خامی كه در سطح شهر ایلام در اختیار مصرف كنندگان قرار می گرفت به اشریشیا كلی وروتوكسیژنیك مورد بررسی قرار گرفت. نمونههای مورد مطالعه شامل ۴۹۷ نمونه شیر خام بود كه ۳۷۵ نمونه از سطح شهر و همچنین ۱۲۲ نمونه از گاوداری های صنعتی تهیه شد . برای جداسازی اشریشیا كلی های تولید كننده وروتوكسین (VTEC) از روش استخراج با پلی میكسین (-Colony SWeep PolymiXin B Extraction) و برای تشخیص سروتایپ O 157 :H7 از خاصیت عدم تخمیر قند سوربیتول و آگلوتیناسیون با آنتی سرمهای O)157:H7 و نهایتا آنتی بیوگرام سویه های جدا شده استفاده شد. به طور كلی در این بررسی از ۴۹۷ نمونه شیر مورد مطالعه ۹ نمونه (۱/۸۵٪) آلوده به VIEC بودند. خنثی سازی برای تعیین نوع توكسین معلوم نمود كه ۵ نمونه (۵۵/۵۵ ٪) با آنتی سرم 1-V T و ۳ نمونه (۳۳/۳۳ ٪) با آنتی سرم 2-VT خنثی شدند و ۱ نمونه (۱۱/۱۱ ٪) نیز با مخلوطی از آنتی سرمهای 1 -VT - 2/VT خنثی شد كه اینیك سویه به سروتایپ O157:H7 تعلق داشت. اختلاف معنی داری از نظر میزان آلودگی نمونه های شیر در طی فصول مختلف مشاهده نشد. در ضمن میزان آلودگی در بین شیرهایی كه در سطح شهر به فروش میرسید نسبت به شیرهایی كه از گاوداری های صنعتی تهیه می شد اختلاف معنی داری نشان نمیداد (۶۱۳ }۰ = P). در بررسی حساسیت ضد میكروبی سویه ها، از ۹ سویه اشریشیا كلی وروتوكسیژنیك جدا شده ۷ سویه نسبت به آنتیبیوتیك های: آمیكاسین، آمپی سیلین، تتراسایكلین، آموكسی سیلین، سولفامتوكسازول، كانامایسین، جنتامیسین، كلرامفنیكل، مزولوسیلین و سفاماند ولی حساس بودند و ۲ سویه نیز دارای مقاومت چند داروئی بوده و به آنتی بیوتیك های آمپی سیلین، تتراسیكلین، آموكسی سیلین، سولفامتوكسازول و مزولوسیلین مقاوم بودند. در نهایت مطالعه حاضر نشان داد كه اشریشیا كلی های تولید كننده وروتوكسین (VTEC) در شهرستان ایلام دارای اهمیت هستند و تماس با دام و شیر خام غیر پاستوریزه به عنوان عوامل آلوده كننده مطرح هستند ولی سروتایپ O157:H7 در این شهرستان از شیوع پایینی برخوردار

Some Ecoli strains produce cytotoxins that, described by Konowalchuk and coworkers earlier. This toxin has cytopathic effect on Vero cells and identified as Verotoxin. Verotoxin producingEscherichiacoli (VTEC) species arebelong to variety O-serotypes and have relation to Hemolytic Uremia Syndrome (HVS) and Hemorrhagicsyndrome (HS). There is little information about prevalence and distribution of VTEC in Ilam. This study performs for resolve frequency of VTEC in Ilam province. From April 2011 to April 2012,totally 497 unpasteurized milk samples were collected from dairy farms and city markets.Samples were consistingof 375 raw milk those collected from city shops and 122 raw-milk samples, those collected from industrial animal husbandry. For Isolation of Verotoxigenic Ecoli,extraction with polymixin method and no fermentation of Sorbitol and Agglutination with O157:H7 Antiserum method for detection of O157:H7 serotypes were used and anti-bacterial drugs susceptibility was performed. At last among 497 studied samples, nine samples (1.85%) were contaminated with Verotoxigenic E.coli, and 1 sample(11.11%) belonged to O157:H7 serotype. Neutralization with antiserum was performed to determine the toxin type, which revealed neutralization of 5 samples (55.55%) with VT-1 antiserum and neutralization of 3 samples (33.33%) with VT-2 antiserum. One remaining sample (11.11%) was neutralized with a mixture of VT-2/VT-1 antiserums and it was O157H7 serotype. In this study,there was no significant difference between varies raw-milk samples in different seasons(P=0.613). Antibiogram test showed that, 9 Verotoxigenic isolates were susceptible to amikacin, ampieilin, tetracycline, amoxicillin, sulfamethoxazole, kanamycin, gentamycin, chloramphenicol, mezlocillin and cefamandole antibiotics, and 2 species were multidrug resistant to ampieilin, tetracycline, amoxicillin, sulfamethoxazole and mezlocillin. Finally this study revealed that Verotoxigenic E.coli are important in Ilam, and Human contact with animals and their products specially no pasteurized milk as contamination agent, but outbreak of Verotoxigenic E.coli is in low frequency.