بررسي نقش جهش ژني در بيماري هاي مادرزادي قلبي غيرسندرميك نقص جداري دهليزي و نقص جداري بطني

Study of gene mutation in Non-syndromic congenital heart disease Atrial septal defect and ventricular septal defect

بيماري‌هاي مادرزادي قلبي از شايع ترين نارسائي‌هاي دوران كودكي هستند، حدود يك درصد نوزادان زنده متولد شده داراي نقص‌هاي مادرزادي قلبي هستند. هدف اين پروژه شناسايي جهش در ژن NKX2-5 در بيماران داراي نقص ديواره ي بين دهليزي و بين بطني ميباشد. در اين تحقيق100 بيمار قلبي ASD و VSD مراجعه كننده به بيمارستان امام علي كرمانشاه و بيمارستان توحيد سنندج، به منظور تعيين جهش در ژنNKX2-5 ارزيابي شدند. منحني هاي ذوب اين نمونه ها توسط Real-time PCR و رنگ Sybr Green و با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي ژن Nkx2-5 بدست آمد. در نتيجه ي آناليز منحني هاي ذوب، دو گروه نقطه ي ذوب متفاوت براي اگزون 1 و يك گروه نقطه ي ذوب براي اگزون A2 بدست آمد. در نتيجه دو نمونه از اگزون يك كه نقطه ذوب متفاوتي داشتند، سه نمونه از گروه ديگر اين اگزون و پنج نمونه از اگزون A2 و B2 تعيين توالي شدند. نتايج جهش پاتوژنيك در نمونه هاي مورد مطالعه را نشان نداد. نتايج تعيين توالي نيز آناليز منحني هاي ذوب Real time PCR را تائيد كرده و يك پلي مرفيسم A65G در دو نمونه ي داراي منحني ذوب متفاوت شناسائي شد. علل عدم مشاهده جهش هاي پاتوژنيك در نمونه هاي مورد مطالعه را مي توان، عوامل محيطي تاثيرگذار بر روي تكوين قلب در حين رشد و تكامل جنين و همچنين احتمال وجود جهش در ژن هاي كدكننده ي ديگر فاكتورهاي رونويسي قلبي از جملهGATA4 و TBX5، ذكر كرد. پيشنهاد مي شود در پژوهش هاي آينده ، نمونه هاي بافتي قلبي نرمال و بيمار اين بيماران مطالعه شده و ژن هاي كد كننده ي ديگر فاكتورهاي رونويسي قلبي نيز بررسي گردند.

Congenital heart diseases are the most common of all birth defects, affecting nearly 1% of all live births. The CHD could take place in any side of the heart: Atrial, ventricular or vascular. NKX2-5 gene on chromosome 5q34 consists of two exons which encode a 324 amino acid protein. This homeobox transcription factor is expressed during early cardiac morphogenesis and serves as a master regulatory protein. Because of its critical role in cardiogenesis, Mutations have been identified in patients with a variety of congenital heart malformations. The goal of this project was to identify NKX2-5 mutations in patients with Atrial Septal Defect (ASD) and Ventricular Septal Defect(VSD). Atrial septal defect (ASD) is a septal defect with a hole in different part of the atrial septum. Ventricular septal defect is a defect with a hole, existing between the lower chambers of the heart (ventricles). We studied 100 patients with ASD and VSD from tavhid hospital of Sanandaj and emam ali hospital of Kermanshah l. These samples were screened with sybr green Real time PCR using Nkx2-5 specific primers. Melt curves analysis show 2 different melt point groups for exon 1 and one group for exon2A. then 2 samples of exon 1 that show different melt points, 3 samples of another group from this exon and 5 samples of exon 2A, 2B randomly sequenced. The results of sequencing confirmed the analysis of real time melt curves and one polymorphism (A65G) was identified in 2 samples with different melt point. The environmental and effective factors on the heart development within embryonic growth and evolution as well as the possibility of the existence of the mutation in coding genes of the other cardiac transcription factors such as GATA4 and TBX5 can be the reasons of the lack of the pathogenic mutation observation in the studied samples in this study. It is suggested in further related studies to investigate normal and abnormal cardiac tissue samples of these studied patients and coding genes of the other cardiac transcription factors