بررسي اثراسموليت D-sorbitol بر فعاليت و پايداري حرارتي آنزيم پراكسيداز نوتركيب LDP(Lepidium draba)

پراكسيدازهاي گياهي ازگروه اكسيدوردوكتازها هستند. آنزيم هايي حاوي هم، يون كلسيم كه يكي از معروف ترين اين پراكسيدازها HRP است كه به طور گسترده در موارد تشخيصي، بيوسنسورها و بيوتكنولوژي كاربرد داشته. در اين پژوهش اثر غلظت هاي مختلف D-Sorbitol بر فعاليت و پايداري حرارتي آنزيم پراكسيداز گياهي (LDP) بررسي مي گردد. در مرحله اول پس ازكشت باكتري در محيط كشت LB، IPTG به منظور افزايش بيان پروتئين استفاده شد. سپس تا شدن دوباره ي آنزيم در حضور هم،كلسيم و GSSG انجام شد. پس از ليز باكتري القا شده تخليص پروتئين با استفاده از ستون نيكل سفارز انجام شد. فعاليت آنزيم در حضور سوبستراهاي H2O2،TMB در تيمار آنزيم با غلظت هاي مختلف (0-6/0مولار) D-Sorbitol مورد سنجش قرار گرفت. علاوه بر اين، فعاليت آنزيم در حضور و عدم حضور اسموليت در دماهاي مختلف اندازه گيري شد. نتايج حاصل از بررسي فعاليت آنزيم نشان داد كه غلظت هاي مختلف سوربيتول باعث افزايش فعاليت آنزيم مي شود و در سطح 5 درصد معني دار مي باشد (P 0.05). بيشترين فعاليت در غلظت 6/0 مولار مشاهده شد. در حضور بالاترين غلظت اين اسموليت پايداري حرارتي نسبت به نمونه ي شاهد به طور معني داري افزايش يافت.