بررسي اثر يون آزايد بر عملكرد آنزيم لاكتوپراكسيداز شير گاو

Effect of azide ion on lactoperoxidase activity in bovine milk

آنزيم لاكتوپراكسيداز يكي از پروتئين هاي مهم شير بوده كه عملكرد دفاعي عليه واريته هاي مختلف ميكروارگانيسم ها منجمله باكتري هاي مضر در شير را ايفا مي نمايد. اين آنزيم جهت عملكرد خود نياز به حضور دو فاكتور ديگر به نام پراكسيد هيدروژن (H2O2) و يون تيوسيانات (SCN-) دارد. اين سه جزء با هم سيستم لاكتوپراكسيداز در شير را تشكيل مي دهند. وجود سيستم لاكتوپراكسيداز در شير باعث افزايش پايداري آن در برابر فساد مي شود. در اين تحقيق هدف بررسي اثر غلظت هاي مختلف يون آزايد به عنوان يك تركيب سمي و آلوده كننده محيط زيست بر فعاليت آنزيم لاكتوپراكسيداز جداشده از شير گاو مي باشد. براي تخليص جزئي لاكتوپراكسيداز از شير گاو، ابتدا نمونه هاي شير بوسيله سانتريفيوژ چربي زدايي گرديد سپس جهت رسوب پروتئين كازئين شير، pH شير از 6 به pH 4/7 (نقطه ايزوالكتريك كازئين) كاهش داده شد. پس از سانتريفيوژ نمونه هاي حاصله، محلول رويي به عنوان منبع آنزيمي مورد استفاده قرار گرفت. فعاليت آنزيم با استفاده از سوبستراهاي ABTS و پراكسيدهيدروژن در طول موج 412 نانومتر اندازه گيري گرديد. جهت بررسي اثر يون آزايد بر فعاليت آنزيم، ابتدا غلظت هاي مختلف يون آزايد در محيط واكنش آنزيمي اضافه و سپس فعاليت آنزيم درحضور يون آزايد بررسي گرديد. نتايج نشان داد كه اولا pH بهينه براي فعاليت ماكزيمم آنزيم لاكتوپراكسيداز 6= pH مي باشد كه با pH شير گاو برابر مي باشد. همچنين مقدار يون آزايدي كه باعث كاهش 50 درصدي فعاليت آنزيم لاكتوپراكسيداز گرديد برابر با 80 /3 ميكرومولار بدست آمد.