بررسي توليد آنزيم آميلاز خارج سلولي توسط سويه هاي بومي باسيلوس سابتيليس و باسيلوس سرئوس

A study on production of extracellular amylases from Bacillus subtilis and Bacillus cereus

آميلازها يكي از مهمترين آنزيم هاي صنعتي هستند كه در مطالعات بيولوژيك اهميت زيادي دارند. آميلاز ميكروبي پتانسيل استفاده در انواع صنايع دارويي، نانوايي، آبجوسازي، نساجي، دترجنت، كاغذ و صنايع تقطيري را دارد. باسيلوس ها از مهم ترين ميكروارگانيسم هاي مولد آنزيم آميلاز هستند. هدف از اين پژوهش بررسي توليد آنزيم آميلاز توسط سويه هاي بومي باسيلوس مي باشد. نمونه هاي خاك از منطقه كشاورزي و نمونه هاي پساب از كارخانه مواد غذايي به صورت تصادفي جمع آوري شد. در اين مطالعه آزمايشگاهي سويه هاي باسيلوس جدا شده به وسيله خصوصيات ظاهري و تست هاي بيوشيميايي شناسايي شدند. سويه هاي خالص جدا شده براي توليد آميلاز با استفاده از نشاسته آگار غربال شدند.. فعاليت آنزيم آميلاز توليد شده به وسيله روش دي نيتروساليسيليك اسيد(DNS) اندازه گيري شد.. بررسي اثر pH هاي 10-6 بر روي توليد آنزيم آميلاز در طي 6 روز انكوباسيون انجام گرفت. اثر دماهاي مختلف در توليد آنزيم آميلاز مورد مطالعه قرار گرفت. با توجه به جدول باسيلوس هاي كتاب برگي، نمونه جداسازي شده از خاك متعلق به گونه باسيلوس سرئوس و نمونه جداسازي شده از پساب متعلق به گونه باسيلوس سوبتيلس بود. آنزيم آميلاز توليد شده در محيط توليد مايع بوسيله باسيلوس سوبتيليس برابر با U/ml 210/7 و براي باسيلوس سرئوس برابر با U/ml 08/7 اندازه گيري شد.. در اين تحقيق مشخص شد كه بيشترين ميزان توليد آنزيم آميلاز بعد از 72 ساعت انكوباسيون در گونه باسيلوس سوبتيليس در 7=pH و دماي 40 درجه سانتي گراد و در مورد باسيلوس سرئوس در 8=pH و دماي 35 درجه سانتي گراد صورت مي گيرد. . حداكثر توليد آنزيم آميلاز مورد باسيلوس سوبتيلس U/ml 612/7 و در مورد باسيلوس سرئوس U/ml 543/7 مي باشد. در اين تحقيق جداسازي سويه هاي باسيلوس مولد آنزيم آميلاز از منابع مختلف شامل خاك و پساب انجام شد. سويه هاي مختلف باسيلوس از لحاظ ميزان توليد آنزيم آميلاز در دما و pH هاي مختلف مقايسه شدند كنند طبق بررسي انجام گرفته، استفاده از سويه هاي بومي براي دستيابي به آنزيم آميلاز روشي كارآمد بوده و مي توانند به عنوان سويه هاي صنعتي مناسب در جهت توليد آنزيم آميلاز به كار گرفته شوند

Amylases are among the most important industrial enzymes and also have great significance in biotechnological studies. The microbial amylases could be potentially useful in various pharmaceutical, fine-chemical, baking, brewing, textile, detergent, paper and distilling industries. The aim of this study is isolating amylase enzyme producer natural variant of Bacillus species. Soil and wastewater samples were collected from agricultural area and from food factory. Amylase producing Bacillus were identified by microscope, colony morphology characterization and biochemical tests. Bacillus isolates were screened for amylolytic properties by starch hydrolysis test on starch agar plate. Amylase enzyme activity of isolates was measured using di-nitro salicylic acid (DNS) method. Effect of pH 6-10, for 6 days was studied on enzyme production and effect of temperature on enzyme production was studied, The isolated were identified as Bacillus subtilis and Bacillus cereus according to Bergey s Manual of Systematic Bacteriology. Bacillus subtilis and Bacillus cereus produced 7/210 U/ml and 7/080 U/ml of amylase respectively in culture broth. The maximum enzyme Production were observed at pH=7, temperature=40 °C, for Bacillus subtilis and maximum amylase production for Bacillus cereus were achieve at pH=8, temperature=35 ºC, after 72 h. Amylase activity in the best condition were for Bacillus subtilis 7/612 U/ ml and Bacillus cereus 7/ 543 U/ml respectively. In this study amylase producer strains of Bacillus spp. were isolated from difference sources consist of soil and wastewater. Enzyme production media were assessed and controlled for enzyme productivity using variose pH and temperature. therefore, use of native species for obtain amylase enzyme can be amylase enzyme produced on a commercial scale is discussed.