شناسايي و بررسي اثرات ضد باكتريايي و ضد قارچي باكتري ميكروكوكوس جدا شده از خاك منطقه رامسر

Identification and evaluation of antibacterial and antifungal effects of Micrococci spp isolated from soil samples in Ramsar province, Iran

ميكروارگانيسم منابع بالقوه براي كنترل عوامل بيماري زا مي باشد. جنس ميكروكوكوس به عنوان فلور نرمال باكتريايي پوست است و بطور گسترده در نمونه هاي محيطي موجود است. مطالعات قبلي نشان داد كه اين باكتري ها در مقابل بسياري از ميكروارگانيسم ها داراي اثر مهاري بر روي باكتري و قارچ مي باشند. هدف از انجام اين مطالعه، شناسايي و بررسي اثرات ضد باكتريايي و ضد قارچي باكتري ميكروكوكوس جدا شده از خاك منطقه رامسر بود. در مجموع، 50 نمونه از عمق 15-10 سانتي متر از محل هاي مختلف در شهرستان رامسر جمع آوري شد. سپس، اين نمونه به آزمايشگاه در شرايط استريل منتقل و از نمونه هاي خاك سريال دايلوشن تهيه شد. سپس سوسپانسيون ميكروبي در آب مقطر استريل با رقت 9-10 تا 1-10 در پليت هاي استريل حاوي محيط نوترينت آگار كشت و كلني زرد جداسازي شد. سپس، هر گونه توسط خصوصيات مورفولوژيك و بيوشيميايي شناسايي شد. DNA استخراج و واكنش زنجيره اي پليمراز با آغازگر ژني 16S rRNA انجام شد. تعيين اثر مهاري ايزوله ها بر روي باكتري هاي آزمون با روش انتشار در آگار انجام شد. فعاليت ضد باكتريايي و ضد قارچي در مقابل اشرشيا كلي، استافيلوكوكوس اورئوس، باسيلوس سوبتيليس و كانديدا آلبيكنس در مولر هينتون آگار مورد ارزيابي قرار گرفت. نتايج ما نشان داد تنها سه گونه به عنوان ميكروكوكوس لوتوس توسط روش هاي فنوتيپي و مولكولي شناسايي شد. اثر آنتي باكتريال بر روي باسيلوس سوبتيليس با تشكيل هاله به قطر 25 ميلي متر براي نمونه اول و 15 ميلي متر براي نمونه دوم اثري مهاري مشاهده شد ولي روي رشد اشرشيا كلي و استافلوكوكوس اورئوس اثر نداشتند و همچنين اثرات ضد قارچي جدايه ها با مهار رشد كانديدا آلبيكنس با قطر هاله 20 ميلي متر مشاهده گرديد. نتايج اين مطالعه نشان مي دهد كه ميكروكوكوس يك گونه واجد اثرات ضد باكتريايي و ضد قارچي بر عليه باسيلوس سوبتيليس و مخمر قارچ بيماري زا كانديدا آلبيكنس بود اما اشرشيا كلي و استافيلوكوكوس اورئوس نسبت به گونه ميكروكوكوس مقاوم بودند. مزاياي سويه مورد مطالعه و ويژگي هاي بيوشيميايي اثرات ضد ميكروبي آن نيازمند بررسي هاي بيشتر مي باشد.

Microorganisms are potential sources to control pathogenic factors. A Micrococcus genus is as the bacterial normal flora of the skin and widespread in the environment samples. A previous study indicated that these bacteria have an antibacterial and antifungal inhibitory effect versus a lot of microorganisms. A total of 50 soil samples were collected from 10-15 cm depth of different localities at Ramsar city of Iran. Then, these samples were transferred to the laboratory at sterile condition. A serial broth dilution was prepared from The soil samples according to Chilcott and Wigley, guideline. Each 1 g of the soil sample was suspended in 9 ml sterile water and Was shaken strongly for 2 min. The soil samples were heated at 60 °C for 60 min in a water bath. Then the liquid was serially diluted in sterile distilled water, and the dilution from 10−1 to 10−7 was inoculated on nutrient agar medium and purified plates containing large and yellow colonies. Then, each strain was identified by morphological and biochemical characteristics. DNA was extracted by DNG-plus extraction Kit (Cinnagen Co., Iran) and PCR amplification was performed with 16srRNA primers. The determination of the inhibitory effect of isolates on test bacteria was carried out according to the agar-well diffusion method. The antibacterial and antifungal activity was evaluated versus Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis and Candida albicans in Mueller-Hinton agar. The results indicated That only three strains were identified as Micrococcus luteus by phonotypic and molecular procurement . The inhibitory effect of Micrococcus spp against Bacillus subtilis was observed by halo forming in 25 ml-1 diameter for the first time and 15 ml-1 for the second time but these bacteria did not have any inhibitory effect versus Escherichia coli and Staphylococcus aureus. The antifungal effects of Micrococcus spp Were detected by inhibiting the growth of Candida albicans with 20 ml-1 halo diameter.This study indicated that Micrococcus spp had an antibacterial and antifungal effect against Bacillus subtilis and yeast pathogenic fungi, but Escherichia coli and Staphylococcus aureus were resistant to Micrococcus spp. The benefits of The strains and the biochemical characteristic of the antimicrobials determined are subject to further studies.