شناسايي واريانت هاي آللي در جايگاه ژني SHBG موثر بر صفات توليد مثلي در گاو هلشتاين و مونبليارد با روش PCR-SSCP

Detection of allelic variants in SHBG locus affecting reproduction traits in Holstein and Montbeliarde cattle by SSCP method

هدف از پژوهش حاضر شناسايي واريانت هاي آللي ژن SHBG با روش PCR-SSCP در گاوهاي هلشتاين و مونبليارد در ايران بوده است. به اين منظور 250 نمونه خون (150 نمونه هلشتاين و 100 نمونه مونبليارد) تهيه و استخراج DNA با كيت انجام شد. سپس يك جفت آغازگر اختصاصي با نرم افزار Oligo7 طراحي شد به طوري كه يك قطعه از اگزون 3 اين ژن كه حاوي جهش موثر بر باروري گاو هلشتاين و مونبليارد بود را تكثير نمايد. پس از PCR تعيين ژنوتيپ نمونه ها با روش SSCP انجام و فراواني هاي ژني و زنوتيپي با نرم افزار POPGEN محاسبه شدند. در اين جايگاه دو ژنوتيپ AA و AB به ترتيب با فراواني هاي 0/47، 0/53 و 0/04 و 0/96 درصد در دو نژاد هلشتاين و مونبليارد مشاهده شدند. همچنين فراواني هاي آللي در دو جعيت هلشتاين و مونبليارد براي آلل هاي A و B به ترتيب 0/735،0/235 و 0/52 و 0/48 برآورد گرديد. تست دقيق فيشر و تست كاي-اسكوئر به ترتيب براي مقايسه فراواني هاي آللي و ژنوتيپي بين دو جمعيت نشان داد كه اختلاف آماري معني داري از نظر فراواني ژني وجود ندارد اما فراواني هاي ژنوتيپي با هم اختلاف معني دار آماري (P 0.05) نشان دادند. با توجه به نقش اين ژن در كاهش توانايي باروري گاو هلشتاين و با توجه به نتايج حاصل شده در اين پژوهش بررسي ساير قسمت هاي ژن SHBG از جمله ناحيه تنظيمي و اينترون هاي آن و ارتباط آن با صفات توليدمثلي و توليدي در جمعيت گاوهاي شيري پيشنهاد مي شود.

The aim of the preset study was to detection of allelic variants of SHBG gene using PCR-SSCP method in Holstein and Monthbeliarde cattle in Iran. For this purpose, 250 blood samples (150 Holstein samples and 100 Montbeliarde samples) were prepared and DNA was extracted by kit. Then, a specific primer pairs was designed using Oligo7 software which amplified a fragment from exon 3 of this gene that contained effective mutation influenced Holstein and Montbeliarde cattle fertility. After PCR, the genotyping was done by SSCP assay and allelic and genotypic frequencies were calculated by POPGEN software. In this locus two genotypes of AA and AB were observed in Holstein and Montbeliarde cattle with frequencies of 0.47, 0.53 and 0.04 and 0.96, respectively. Also, allelic frequencies for A and B alleles were 0.735, 0.235 and 0.52 and 0.48 in Holstein and Montbeliarde, respectively. The Fisher exact test and Chi-square test for comparing allelic and genotype frequencies between two populations showed no significant difference in allelic frequencies but genotype frequencies showed significant differences (P 0.05) between two populations. According to role of this gene in reduction of fertility in Holstein cattle and according to results obtained from present study, investigation of other regions of SHBG such as regulatory region and introns and its association with reproduction and production traits in population of dairy cattle are recommended.