بررسي چندشكلي اگزون چهارم ژن كاپاكازئين در گوسفند نژاد كرماني با استفاده از روش PCR-RFLP

Study polymorphism of kappa-casein gene exon 4 in kermani sheep using PCR-RFLP

كاپاكازئين يكي از اجزاي مهم پروتئيني از خانواده پروتئين هاي كازئيني در شير مي باشد كه نقش بسيار مهمي را در ثبات ميسل ها به عهده داشته و در راندمان تبديل شير به پنير داراي اهميت ويژه اي در صنعت پنيرسازي است. اين پژوهش به-منظور شناسايي چندشكلي موجود در ناحيه ي اگزون چهارم ژن كاپاكازئين گوسفند نژاد كرماني با استفاده از روش چندشكلي طول قطعه برشي مبتني بر واكنش زنجيره اي پلي مراز انجام گرفت. براي اين منظور از 30 راس گوسفند نژاد كرماني به طور تصادفي خونگيري به عمل آمد. استخراج DNA از هر يك از نمونه هاي خون با استفاده از روش فنل-كلروفرم انجام شد، و قطعه اي با اندازه 645 جفت باز شامل قسمتي از ناحيه اگزون چهارم ژن كاپاكازئين تكثير شد. كيفيت DNA ژنومي و نمونه¬هاي حاصل از واكنش زنجيره اي پليمراز به با استفاده از ژل آگارز يك درصد مورد بررسي قرار گرفت. جهت تعيين ژنوتيپ، محصول واكنش زنجيره اي پلي مراز توسط آنزيم HaeIII مورد هضم قرار گرفته و قطعات DNA حاصله با استفاده از ژل آگارز دو درصد الكتروفورز و جداسازي شدند. فراواني هاي آللي A و B براي ژن CSN3 به ترتيب برابر 0.7 و 0.3 براي جمعيت مورد بررسي به دست آمد. آزمون كاي-مربع بيانگر عدم تعادل هاردي واينبرگ در جمعيت گوسفند كرماني بود.

Kappa casein is one of the most important components in the milk protein casein family of proteins that plays acrucial role in micelle to the stability and efficiency in milk cheese has a special importance in the cheese industry. This study was undertaken to identify the polymorphism of kappa-casein gene exon 4 in kermani sheep, using polymerase chain reaction (PCR) and restriction fragment length polymorphism (RFLP) technique. Blood samples were randomly taken from 30 individuals of kermani sheep. Genomic DNA was extracted from each sample by modified phenol-chloroform method. Size 645bp fragment containing part of the fourth exon of the ovine kappa casein gene. Genomic DNA and PCR products samples quality was investigated, using 1% agarose gel. The PCR Products were digested by restriction enzymes HaeIII and the resulted fragments seprated by agarose gel 2% electrophoresis. Allel frequency A and B for CSN3 gene was repectively 0/7 and 0/3 for the population of kermani sheep. Chi-square test represent the imbalance of Hardy-weinberg in population of kermani sheep