مطالعه چندشكلي اگزون 4 ژن GPR54 در گوسفندان مهربان و شال

Evaluation of polymorphism of GPR54 gene in Mehraban and Shal sheep

هدف از اين پژوهش، بررسي چند شكلي اگزون 4 ژن GPR54 در گوسفندان مهربان و شال بود. براي اين منظور از 80 راس ميش نژاد مهربان و 55 راس ميش نژاد شال خون گيري به عمل آمد كه در فلاسك يخ به آزمايشگاه منتقل شد. پس از استخراج DNA از نمونه‌هاي مورد نظر با استفاده از يك جفت آغازگر اختصاصي، قطعه‌اي شامل اگزون 4 ژن GPR54 به طول 321 جفت باز به كمك واكنش زنجيره‌اي پلي‌مراز (PCR) تكثير شد. در ادامه جهت بررسي وجود چند شكلي‌، از روش چندشكلي فضايي تك رشته‌اي (DNA(SSCP براي تعيين ژنوتيپ نمونه‌ها، استفاده شد. الكتروفورز عمودي نمونه‌ها روي ژل آكريلاميد 10% به مدت 22 ساعت و با ولتاژ 250 ولت صورت گرفت. رنگ آميزي ژل به روش نيترات نقره انجام شد كه در نتيجه آن دو الگوي ژنوتيپي متفاوت مشاهده شد. براي تاييد چند شكلي‌هاي مشاهده شده از هر الگو دو نمونه تعيين توالي شد كه نتايج حاصل از توالي‌يابي نشان دهنده يك جهش تك نوكلئوتيدي (e.106C A) در اگزون ژن مورد نظر بود و دو ژنوتيپ هموزيگوت CC و هتروزيگوت CA مشاهده گرديد.

In the present study, evaluation of polymorphism of GPR54 gene and its association with litter size in Mehraban, shal and their hybrids with Romanov sheep breed. For this purpose, 80 ewes mehraban, 25 ewes shal and 21 ewes crossbred ewes hybrid mehraban- Romanovs and 30 ewes crossbred ewes hybrid shal-Romanov blood samples were taken which were transported to the laboratory in ice boxes. Afterextracting DNA from samples using specific primers, a piece exon four geneGPR54 a length of 321 bp polymerase chain reaction (PCR) amplified. In order to investigate the presence of polymorphism, a single-stranded DNA polymorphism (SSCP) was used to determine the genotype of the specimens. Vertical electrophoresis was performed on 10% acrylamide gel for 22 hours at 250 volts. The gel was stained with silver nitrate method, which resulted in two different genotypic patterns. Results of DNAsequencing also showed ( e.106G A) in exon four with CC and CA genotypes.