اثر آلبومين سرم گاوي به عنوان يك عامل شلوغ كننده بر تجمع ليزوزيم

Effect of BSA as a Crowding Agent on the Aggregation of Lysozyme

تجمع پروتئين در بيوتكنولوژي ومكانيزم برخي بيماري ها اهميت زيادي دارد. حداقل 25پروتئين انساني شناخته شده اند كه تجمع آن ها سبب بيماري هاي گوناگون از جمله بيماري هاي تخريب كننده سيستم عصبي مي شوند.ليزوزيمسفيده تخم مرغ،كهدر اين مطالعه مورد بررسي قرار گرفته است، مستعد تشكيل آميلوئيد است وجهش در آن موجب يك بيماري به نام آميلوئيدي شدن سيستمي وراثتي مي-شود. ازدحام مولكولي اثرقابل توجهي برميان كنش پروتئين -پروتئين و تجمع پروتئين دارد. اثر ازدحام مولكولي را مي توان در حضور غلظت هاي بالايي ازمولكول هايي كه از نظر شيميايي بي اثر هستند، درمحيط آزمايشگاهي شبيه سازي و مطالعه كرد. در اين پروژه اثر آلبومين سرم گاوي، به عنوان عامل شلوغ كننده، بر سينتيك تشكيل تجمع ليزوزيم، با استفاده از روش هايي نظير طيف سنجي فلورسانس تايوفلاوين تي و ميكروسكوپ نيروي اتمي بررسي شده است. ابتدا در دماي 54 درجه سانتي گراد و pH2 و زمان هاي انكوباسيون مختلف همراه با تكان دادن (300 دور در دقيقه) شرايط تجمع فراهم شد. اثر عامل هاي شلوغ كننده بر تجمع ليزوزيم در زمان هاي انكوباسيون 24، 48، 72 و 96 ساعت و در غلظت هاي مختلف (5 /0 ، 1، 2، 4, 8 و 20 ميلي گرم برميلي ليتر) بررسي شد. نتيجه هاي فلورسانس تايوفلاوين تي نشان داد كه افزايش در مدت زمان انكوباسيون نمونه هاي ليزوزيم باعث افزايش در نشر فلورسانس و افزايش شكل گيري تجمع هاي آميلوئيدي بوده است. همچنين معلوم شد كه افزايش غلظت عامل شلوغ كننده آلبومين سرم گاوي هم باعث افزايش در نشر فلورسانس مي شوند.نتايج حاصل ازميكروسكوپ نيروي اتمي نتيجه فلورسانس را تائيد كرد و نشان داد كه افزايش غلظت سبب پيدايش تجمع هاي اوليگومري و فيبريلي در نمونه ها مي شود.