تهيه DNA آپتامر براي تشخيص آنتي‏بيوتيك فلورفنيكل و ساخت آپتاسنسور فلورسنت حساس براي شناسايي اختصاصي فلورفنيكل در شير

آپتامرها، اوليگونوكلئوتيدهايي صناعي، با اختصاصيت بالا هستند كه براي تشخيص آلاينده‏هاي مختلف غذايي از پتانسيل بالايي برخوردارند. در اين مطالعه، براي كنترل موارد بيش از حد مجاز در استفاده از آنتي‏بيوتيك‏ها، آپتامرهاي اختصاصي براي آنتي‏بيوتيك فلورفنيكل توسط يك روش SELEX اصلاح شده با بيدهاي مغناطيسي جداسازي شدند. در اين فرآيند، مجموعه تصادفي اوليه‏اي از DNA تك رشته‏اي با هدف انكوبه شده و توالي‏هاي متصل شده به آنها براي دورهاي بعدي بازيابي مي‏شدند. شرايط انتخاب بعد از هر دور سخت‏تر مي‏شد و به منظور انتخاب در هر دور محصولات PCR در ژل آگاروز تزريق و كيفيت و كميت آن‏ها آزمايش مي‏گرديد. انتخاب آپتامرها براي 12 دور انجام شد. محصول دور 11 SELEX كلون و 36 آپتامر شناسايي و براساس شباهت بين توالي ها به 5 گروه تقسيم‏بندي شدند. ثابت اتصال (Kd) سه توالي از گروه‏هاي مختلف، با روش فلوريمتري تعيين شد. در نهايت سه توالي80 نوكلئوتيدي شناسايي شدند كه از ميل پيوندي و اختصاصيت بالايي (nM 4/211و 51/96 و 78/52 =Kd ) برخوردار بودند. روش فلورسنت براي اندازه‏گيري باقي‏مانده فلورفنيكل و متابوليت اصلي آن فلورفنيكل‏آمين در نمونه‏هاي شير نيز بكار گرفته شد. بازه تشخيص زيست حسگر در بافر PBS در محدودهnM 5000-5 و حد تشخيص nM 58/1 و nM 09/2 به ترتيب براي فلورفنيكل و فلورفنيكل‏آمين به دست آمد. همچنين بازه تشخيص در شير در محدوده nM1200-5 و حد تشخيص برابر nM 75/5 محاسبه شد. در نهايت برهمكنش بين مولكول فلورفنيكل و آپتامر با روش استاتيك مدل‏سازي شد. اين روش فلورسنت بر پايه صفحات اكسيدگرافن، روشي ساده و سريع براي آناليز فلورفنيكل و متابوليت اصلي آن فلورفنيكل‏آمين در شير خام مي‏تواند باشد.