ساخت دستواره‌ي بياني گياهي حاوي ژن ساختگي AsnB رمز كننده‌ي آنزيم L-آسپارژيناز II

در دهه‌هاي اخير توسعه‌ي تكنولوژي‌هاي مبتني بر DNA و سيستم‌هاي بيان پروتئين نوتركيب بطور وسيعي براي توليد انواع مختلف پروتئين‌هاي نوتركيب دارويي بكار رفته است. اخيرا، بدليل پتانسيل هزينه‌ي پايين، توليد پروتئين‌هاي نوتركيب با كيفيت بالا و مقياس‌پذيري بالا ‌كاربرد گياهان بعنوان يك سيستم توليد توجه زيادي را به خود جلب كرده است. يكي از پروتئين‌هاي نوتركيب مهم L-‌آسپارژينازII (ASN) است كه تحت نام تجارتي Elspar براي درمان لوسمي لنفوبلاستيك حاد (ALL) در Escherichia coli نوتركيب توليد مي‌شود. ما در اين تحقيق ساخت يك ناقل دوتايي حاوي نسخه‌ي بهينه‌سازي شده‌ براي بيان گياه از ژن Asn رمز كنندهASN را شرح مي‌دهيم. به اين منظور، براساس توالي AsnB در NCBI، ژن AsnB بهينه‌سازي شده براي توتون بطور مصنوعي ساخته شد و در پايين‌دست راه‌انداز تقويت شده CaMV 35S ناقل دوتايي pBI121 كلون گرديد. يك توالي برچسب هيستيدين و يك توالي رمز كننده پپتيد نشانه نگهداري در شبكه‌ي اندوپلاسمي (KDEL) نيز به انتهاي 3 متصل شده است. دستواره حاصل (با نام pBI121-NtAsn) به E. coli انتقال يافت و درستي ساختار آن توسط آناليزهاي برش آنزيمي و PCR تأييد شد. دستواره نوتركيب مي‌تواند براي بيان و توليد ASN در يك پلت فرم گياهي در تحقيقات بعدي مورد استفاده قرار گيرد.