توليد پروتئين نوتركيب فسفوليپاز A2 زهر زنبور عسل (آپيس مليفرا)

Production of recombinant phospholipase A2 of honey bee ( Apis mellifera) venom

بيان مسئله: از آن جايي كه زهر زنبور عسل حاوي آلرژن هاي متعدد و پيچيده اي مي باشد لذا تشخيص و پيشگويي الرژن‌هاي عمده آن براي بيماران آلرژيك ضروري مي باشد. تنوع آلرژن ها در زهر زنبورعسل در روش هاي تشخيصي و مديريت درماني بيماران آلرژيك تاثيرگذار مي باشد. از آن جايي كه فسفوليپاز A2 يكي از مهمترين تركيبات آلرژن زهر زنبور عسل مي باشد، لذا در اين طرح اقدام به كلون نمودن و بيان ژن اين پروتئين گرديد. هدف پژوهش: كلونينگ و بيان ژن پروتئين فسفوليپاز A2 زنبور عسل) آپيس مليفرا( روش و چگونگي انجام پژوهش: ابتدا استخراج توالي ژن فسفوليپاز A2 زهر زنبورعسل ) آپيس مليفرا ( از داده پايگاه NCBI صورت گرفت. سپس بهينه سازي كدون ها جهت بيان مناسب ژن در سلول هاي CHO با استفاده از نرم افزارهاي مرتبط انجام پذيرفت و سنتز ژن فسفوليپاز A2 و كلونينگ آن در وكتور PCDNA توسط كمپاني ماكروژن صورت گرفت. پلاسميد به واسطه ترانسفكت كردن باكتري اشريشيا كلاي ازدياد يافت و سپس ترانسفكت نمودن سلول هايCHO ، با روش كلرور كلسيم و انتخاب سلول هاي حاوي پلاسميد بر اساس مقاومت به آنتي بيوتيك نئومايسين در محيط كشت هامز اف 12 انجام پذيرفت. پس از 22 ساعت، سوپ سلول هاي ترانسفكت شده جمع آوري و مورد آزمايش SDS-PAGE قرار گرفت. يافته ها و نتيجه گيري: در آزمايش الكتروفورز كه بمنظور تاييد بيان ژن فسفوليپاز A2 در سوپ سلولها انجام پذيرفت باندي قابل انتظار با وزن مولكولي حدود 22 كيلودالتون بدست آمد كه با گزارشات ديگر محققين در اين خصوص مطابقت داشته است. فسفوليپاز A2 يكي از قوي ترين الرژن هاي زهر زنبورعسل مي باشد لذا بنظر مي رسد كه توليد پروتئين نوتركيب آن مي تواند در تشخيص دقيق تر و جزئي تر آلرژي به زهر زنبور عسل در مقايسه با كاربرد پروتئين هاي تام زهر كمك كننده باشد.