اثر رقيق كننده هاي مختلف بر نسبت جنسيت اسپرم گاو هلشتاين با تكنيك real-time qPCR

ذخيره كردن مني مهم ترين مرحله در تلقيح مصنوعي است و هدف، طولاني كردن طول عمر اسپرماتوزوئيدها در درجه حرارت كم مي باشد.يكي از اجزاي معمول رقيق كننده ها، زرده تخم مرغ است كه از اسپرم در برابر شوك سرمايي محافظت مي كند. مشكلات رقيق كننده هاي حاوي منابع حيواني منجر به افزايش تمايل براي استفاده از منابع گياهي شده است.از جمله رقيق كننده اي كه عاري از زرده تخم مرغ مي باشد، آندرومد است. اين رقيق كننده داراي ويژگي هاي خاصي نسبت به زرده تخم مرغ است كه بعنوان جايگزيني براي زرده تخم مرغ مورد استفاده قرار مي گيرد. رقيق سازي و خنك كردن اسپرم باعث ايجاد حساسيت اسپرم به تكه تكه شدن DNA شده كه منجر به تغيير نسبت جنسي مي شود. پژوهش حاضر به منظور مقايسه اثر رقيق كننده تريس-زرده تخم مرغ و آندرومد بر نسبت جنسيت اسپرم انجام شده است. در اين تحقيق پس از رقيق كردن نمونه ها، به منظور شستشوي مني و حذف سلول هاي مرده و ساير مواد اضافي اسپرم از Swim up استفاده شد، سپس از اسپرم استخراج شده از روش Swim up، استخراج DNA به روش بهينه يافته نمكي انجام گرفت. پس از استخراج DNA، real-time PCR براي تكثير قطعات 90، 89، 79 جفت بازي به ترتيب براي ژن هاي PLP، SRY، PAR با استفاده از جفت آغازگرهاي اختصاصي انجام گرفت و آناليز آماري با استفاده از آزمون t-test انجام گرفت و نسبت جنسيت محاسبه شد كه نشان داد، در نمونه هاي رقيق شده با بافر تريس- زرده تخم مرغ ميان جمعيت اسپرماتوزوئيدهاي حامل ژن SRY و PLP تفاوت معني داري وجود ندارد. در صورتيكه در نمونه-هاي رقيق شده با آندرومد بين اسپرماتوزوئيهاي حامل ژن SRY و PLP تفاوت معني دار وجود دارد(05/0 (P و استفاده از رقيق كننده آندرومد منجر به افزايش اسپرماتوزوئيدهاي حامل كروموزوم X مي شود.