خالص سازي نسبي آنزيم گلوتاتيون S ترانسفراز از گونه گاماروس درياي خزر به روش رسوب دهي با نمك آمونيوم سولفات

Partial purification of Glutathione S transferase from GAMMARUS species of the Caspian Sea using ammonium sulfate precipitation

گلوتاتيون S ترانسفراز (GST) يك آنزيم چند عملكردي است كه تصور مي شود در شروع فرايند سم زدايي از تركيبات فعال دارويي نقش فيزيولوژيكي دارد. اين آنزيم واكنش ميان تركيبات گزنوبيوتيك و گروه S-H را كاتاليز مي كنند. اين واكنش اتصالي منجر به كاهش فعاليت بيولوژيكي و افزايش حلاليت تركيب مي شود؛ به گونه اي كه تركيبات حاصل به صورت متصل به گروه تيول، قطبي تر هستند و در نتيجه حذف آنها راحت تر است. فعاليت اين آنزيم در گروه بزرگي از گونه هاي بي مهره بررسي شده است كه نشان دهنده وجود ارتباط بين فعاليت آنزيم GST و تحمل اين ارگانيسم ها نسبت به تركيبات خارجي است. گاماروس از جمله بي مهرگاني است كه به طيف گسترده اي از آلاينده ها حساس هستند و براي تشخيص آلاينده هاي محيطي مناسب مي باشند، به همين دليل معمولا به عنوان ارگانيسم مدل در مطالعات آلودگي هاي محيط زيست استفاده مي شوند. خالص سازي نسبي آنزيم GST هدف اصلي اين مطالعه بوده است. به منظور كاهش حجم،افزايش غلظت و خالص سازي پروتئين ها روش هاي رسوب گذاري مختلفي مي تواند مورد استفاده قرار گيرد. با غلظت هاي مناسب از نمك آمونيوم سولفات،پروتئين ها با حلاليت مختلف از يكديگر جدا مي شوند. در مطالعه ما نمك آمونيوم سولفات با غلظت نهايي 60% و 90% به هموژن گاماروس افزوده شد. محلول حاصل با دور xg12000 سانتريفيوژ شد. سپس محلول رويي (supernatant) در 4 درجه سانتيگراد در بافر فسفات (100mM,PH=7) حاوي 15/0 ميلي مولار نمك NaCl به مدت يك شب دياليز شد. غلظت پروتئين به روش برادفورد اندازه گيري و فعاليت آنزيم GST به روش Habig سنجيده شد. مقدار پروتئين در غلظت 60% و 90% كاهش يافت؛ فعاليت آنزيم در 90% كاهش 3 درصدي داشت اما در مقايسه با آن، در محلول اشباع 60% يك افزايش 4 برابري در ميزان فعاليت آنزيم مشاهده شد. در نتيجه، يافته هاي موجود رسوب با آمونيوم سولفات را به عنوان يك روش براي تغليظ و تخليص آنزيم پيشنهاد مي كند.