مطالعه ژن هاي Sodium: Protonantiporter و Serin/Threonin kinase در پاسخ به تنش شوري در گياه اسطوخودوس با روش cDNA-AFLP

Study of genes sodium: Protonantiporter and Serin/Threonin kinase response to salt stress in lavandul aangustifolia L. using cDNA-AFLP

اسطوخودوس گياهي متعلق به خانواده نعناع است.گياهان دارويي در زمان بروز انواع تنش هاي محيطي واكنش هاي متفاوتي از خود نشان مي دهند كه توليد متابوليت هاي ثانويه يكي از مكانيسم هاي مقابله گياه مي باشد و توليد آنها در گياهان دارويي تحت تاثير عوامل محيطي از جمله شوري است.در اين تحقيق تكنيك cDNA-AFLP براي شناسايي برخي از ژن هاي افتراقي پاسخ دهنده به تنش شوري در گياه اسطوخودوس به كار گرفته شد.اسطوخودوس در بستر پرليت كوكوپيت 2:1 ) در سه تكرار كشت گرديد. تيمار شوري با غلظت هاي صفر، 25 و 50 ميلي مولار از NaCl اعمال شد. نمونه برداري براي استخراج RNA با استفاده از روش بيوزول صورت گرفت. پس از استخراج RNA كل ، mRNA تخليص شد. از روي mRNA جدا شده رشته اول و دوم cDNA ساخته شد. cDNA دو رشته اي با استفاده از آنزيم هاي TaqI و PstI مورد هضم قرار گرفت و پس از اتصال آداپتور به آنها قطعات تكثير شدند.پس از جداسازي باندهاي داراي بيان افتراقي از روي ژل اكريلاميد،در باكتري E.Coli همسانه سازي و سپس توالي يابي شدند. با استفاده از نرم افزار BlastX تعيين خصوصيت ژن ها صورت گرفت. ژن هاي جداسازي شده در گروه هايي شامل ژن هاي انتقال سيگنال، ژن هاي پاسخ دفاعي و ژن هاي سوخت و ساز سلولي تقسيم بندي شدند.

Lavender is an herb belonging to mint family. Medicinal plants show different reactions against environmental stresses that production of secondary metabolites in plants is one of dependences mechanisms, and production of secondary metabolites is influenced by environmental factors such as salinity. In this study, cDNA-AFLP technique was used for the detection of gene with differential expression to salt stress in lavender. Lavender was planted in Perlite and Cocopeat (1:2) in three replications. Salinity treatments were applied with concentrations comprising 0, 25 and 50 mM NaCl RNA extraction was carried out by using Biozol. After extraction of total RNA, mRNA was purified. First and second strand cDNA were synthesized from isolated mRNA. The double-strand cDNA were digested using TaqI and PstI enzymes and then were amplified after adaptor ligation to thefragments Differential expressions of the bands isolated from Acrylamide gel were cloned in E. Coli bacteria and then were sequenced. Gene characterization was performed using soft ware such as Blast X. In light of the results it appears that Separated genes were classified tothe groups including signal transduction genes, immune response genes and cellular metabolism genes