جداسازي و توليد فرم نوتركيب آنزيم گالاكتوز دهيدروژناز شناسايي شده از باكتري سودوموناس فلورسانس JK-91

زمينه و هدف: گالاكتوز دهيدروژناز، آنزيمي از خانواده دهيدروژناز ها است. اين آنزيم با تعيين و اندازه گيري اختصاصي گالاكتوز 1- فسفات، نقش مهمي درطراحي و ساخت كيت هاي غربالگري بيماري گالاكتوزمي دارد. هدف از اين پژوهش، توليد فرم نوتركيب آنزيم گالاكتوز دهيدروژناز شناسايي شده از سوش بومي سودموناس فلورسانس جداسازي شده از مناطق ساحلي استان هرمزگان بود. روش ها: ابتدا ژن آنزيم مربوطه با استفاده از تكنيك هاي متداول جداشده و سپس با كمك روش هاي مهندسي ژنتيك فرم نوتركيب آن توليد شد. بيان آنزيم نوتركيب توسط روش هاي سنجش فعاليت بيولوژيك و SDS- PAGE تاييد شده و با استفاده از روش كروماتوگرافي تمايلي تخليص گرديد. خصوصيات كينتيكي و فيزيك وشيميايي آنزيم توليد شده نظير پارامتر هاي كينتيكي، دما و pH بهينه ي فعاليت، پايداري آنزيم و جرم مولكولي توسط روش هايي نظير كروماتوگرافي ژل فيلتر اسيون مطالعه شدند. نتايج: بهترين شرايط توليد گالاكتوز دهيدروژناز نوتركيب با IPTG ا1 ميلي مولار در دماي 30 درجه سانتي گرادو زمان القاء 6 ساعت بدست آمد. فعاليت آنزيم توليد شده، 3300U/ml محاسبه شد و ترادف نوكلئوتيدي آنزيم، پروتئيني به طول 308 آمينواسيد را كد مي نمود و وزن مولكولي هر زير واحد توسط الكتروفورز SDS-PAGE ، ا34 كيلو دالتون محاسبه شد. بطورخلاصه، فرم نو تركيب گالاكتوز دهيدروژناز از سودموناس فلورسانس توليد شد و خصوصيات كينتيكي و فيزيك وشيميايي آن مطالعه گرديدند. مرحله بعدي تحقيق،بررسي كاربرد آنزيم ذكر شده در طراحي كيت مي باشد.